Приготовление стандартного 1% раствора мочевины
1) 1 г мочевины растворить в 100 мл Н2О. Из этого основного раствора готовят рабочий раствор разведением основного в 10 раз (1 мл раствора довести до 10 мл Н2О).
2) 250 мг мочевины растворить в 25 мл Н2О (развести в 10раз - 1мл раствора довести до 10 мл H2O).
В 1 мл раствора содержится 1 мг мочевины (С=1г/л, 16,65 Ммоль/л, 1мг/мл; 0,1 мг/0,1 мл)
Таблица. Данные для построения калибровочной кривойпо мочевине
| Мочевина, мл | H2O мл | Реактив (ДАМ), мл | «С»мочевины мг/мл ; γ/мл | «С»мочевины г/л | «С»мочевины Ммоль/л | |
| 0,1 | 2,9 | 0,1 10 | 0,1 | 1,67 | ||
| 0,3 | 2,7 | 0,3 30 | 0,3 | 5,0 | ||
| 0,5 | 2,5 | 0,5 50 | 0,5 | 8,32 | ||
| 0,8 | 2,2 | 0,8 80 | 0,8 | 13,32 | ||
| 1 100 | 16,65 |
Строят калибровочную кривую и рассчитывают результат, используя коэффициент К (котангенс угла наклона кривой) по формуле:
«С» мочевины мг/мл = Еоп. *К *5
1.1.1. Определение содержания мочевины по цветной реакции с диацетилмоноксимом с помощью стандартных коммерческих наборов.
Ход определения проводят по инструкции
| Компоненты | Опытная проба (мл) | Контрольная проба (мл) | Калибратор (мл) | Контроль (мл) |
| Рабочий раствор | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Исследуемый образец | 0,5 | 0,5 | - | - |
| Калибровочная проба | - | - | 0,01 | - |
| Дистиллированная вода | - | - | 0,01 |
Расчет проводят по формуле:
Еоп.
А=−−−− • 16,65, где
Ест.
А - концентрация мочевины (моль/л); Еоп.- экстинкция опытной пробы; Ест.- экстинкция стандартной пробы; 16,65 – концентрация мочевины (ммоль/л) в стандартном растворе.
При содержании мочевины в сыворотке крови выше 16,65 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором, а результаты умножают на коэффициент разведения.