Фракции остаточного азота

Низкомолекулярные азотсодержащие соединения

Фракции остаточного азота

мочевина(примерно 50%), аминокислоты (около 25%), креатин и креатинин (7,5%), полипептиды, нуклеотиды и азотистые основания (5%), мочевая кислота… Увеличение фракций остаточного азота (азотемия) по своему характеру может быть… В некоторых лабораториях до сих пор применяется определение общего содержания остаточного азота, но наибольшее…

Методы определения мочевины

1.Ксантгидроловые: гетероциклический спирт ксантгидрол вступает в реакцию с мочевиной и образует нерастворимую диксантилмочевину, которую в… 2.Гипохлоритные— метод Б.А.Рашкована, состоящий в появлении характерной… 3.Диацетилмонооксимные методы основаны на реакции Фирона — взаимодействии мочевины и диацетилмонооксима с образованием…

Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.

    Мочевина Диацетилмонооксим на первой стадии в воде распадается на диацетилкетон и гидроксиламин:

Реактивы.

  2.Водный раствор диацетилмонооксима - 2,5 г/100 мл. Реактив стоек.  

Ход определения.

  2.В чистую пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости и 5 мл цветного…  

Стандартная кривая зависимости концентрации мочевины от показателей экстинкции.

1) 1 г мочевины растворить в 100 мл Н2О. Из этого основного раствора готовят рабочий раствор разведением основного в 10 раз (1 мл раствора довести… 2) 250 мг мочевины растворить в 25 мл Н2О (развести в 10раз - 1мл раствора… В 1 мл раствора содержится 1 мг мочевины (С=1г/л, 16,65 Ммоль/л, 1мг/мл; 0,1 мг/0,1 мл)

Нормальные величины

Влияющие факторы

· in vivo: увеличение — нефротоксичные препараты, кортикостероиды, избыток тироксина; снижение — увеличение концентрации соматотропного гормона,

· in vitro: снижение (метод с уреазой) — цитрат натрия.

Клинико‑диагностическое значение

Сыворотка

Повышение уровня мочевины может наблюдаться при нарушении функции почек (острые и хронические заболевания, обтурация мочевых путей), нарушении… Снижениеуровня мочевины отмечается при диете с низким содержанием белка, при…

Моча

Повышение количества мочевины в моче связано с гипертиреозом, злокачественной анемией, лихорадкой, при отравлении фосфором, отмечается при диете с высоким содержанием белка, в послеоперационном периоде.

Снижение наблюдается у больных с нефритом и другими заболеваниями почек, уремией, паренхиматозной желтухой, циррозом или дистрофией печени, также у здоровых растущих детей и при низкобелковой диете.

Методы определения мочевой кислоты.

1. Колориметрические — все эти методы недостаточно специфичны и основаны на: способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорновольфрамовую… 2. Энзиматические — определение концентрации мочевой кислоты по расщеплению ее…

Унифицированным методом является фосфорновольфрамовый метод.

Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом

Принцип метода

Мочевая кислота восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив с образованием комплекса голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию в пробе мочевой кислоты. При этом мочевая кислота окисляется до аллантоина (продукт окисления мочевой кислоты) и образуется вольфрамовая синь не установленного состава.

вольфрамовая синь

Реактивы.

Н серная кислота. 10,0 мл концентрированной кислоты вносят в мерную колбу на 500 мл, содержащую небольшое количество дистиллированной воды. После тщательного перемешивания объем доводят дистиллированной водой до метки.

2.Раствор вольфравомовокислого натрия. 50 г волфрамовокислого натрия (Na₂WO₄•2H₂O) помещают в мерную колбу на 500 мл с небольшим объемом дистиллированной воды, после чего доводят ее до метки.

3.Раствор углекислого натрия. 51,5 г Na₂CO₃ растворяют в мерной колбе на 500 мл.

4.Фосфорновольфрамовый реактив. В круглодонную колбу (объем – 1500 мл) вносят 40 г Na₂WO₄•2H₂O и 300 мл дистиллированной воды. Добавляют в смесь 32,0 мл ортофосфорной кислоты (85 г/100 мл) и несколько стеклянных бусинок. Вставляют в колбу обратный холодильник и осторожно кипятят ее содержимое в течение 2 ч на песчаной или глицериновой бане. Охлаждают раствор при комнатной температуре и доводят его объем дистиллированной водой до 1 л. Затем в колбе растворяют 32,0 г сернокислого лития (Li₂SO₄•H₂O). Реактив хранят в темной посуде в холодильнике. Раствор стабилен длительное время.

5.Основной стандартный (калибровочный) раствор – 100 мг/100 мл. В мерной колбе на 100 мл растворяют 0,6 г углекислого лития (Li₂СO₃) в 50 мл дистиллированной воды при нагревании смеси до 60⁰С. Добавляют 100 г мочевой кислоты и содержимое колбы тщательно перемешивают до полного растворения внесенных компонентов. Затем вливают в нее 2,0 мл формалина и 0,15 мл ледяной уксусной кислоты. Содержимое колбы перемешивают и доводят объем дистиллированной водой до метки. Реактив хранят в темной посуде в холодильнике в течение 2 лет. 1 мл раствора содержит 1,0 мг мочевой кислоты.

Рабочий стандартный раствор. 1,0 мл основного калибровочного раствора доводят до 200 мл дистиллированной водой. 1,0 мл раствора содержит 0,005 мг мочевой кислоты. Рабочий стандартный раствор при хранении в холодильнике годен в течение 2 недель.

Ход определения.

В пробирку вносят 8,0 мл воды, 1,0 мл сыворотки, 0,5 мл раствора серной кислоты и содержимое пробирки перемешивают, затем добавляют 0,5 мл раствора вольфрамово- кислого натрия и после тщательного перемешивания через 5-10 мин смесь фильтруют посредством бумажного фильтра. 3,0 мл полученного фильтрата используют для анализа.

2.В две пробирки отмеривают 3,0 мл дистиллированной воды (холостая проба) и 3,0 мл рабочего стандартного раствора. В каждую пробирку (с опытной, холостой и стандартной пробами) вносят 1,5 мл раствора Na₂CO₃ (3), содержимое пробирок перемешивают и вносят 1,0 мл фософорновольфрамового реактива. Растворы взбалтывают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность в кювете с шириной слоя 10 мм при длине волны 590-700 нм (красный светофильтр ФЭКа). Показатели экстинкции опытной и стандартной проб сопоставляют с оптической плотностью холостой (контрольной) пробы. Расчет ведут по формулам:

МК (мг/100 мл) = Е_оп.• С_ст.• 10 / Е_ст. = Е_оп.• 5/ Е_ст.

МК (ммоль/л) = Е_оп. • С_ст.• 10 • 0,059 / Е_ст. = Е_оп. • 5 • 0,059/ Е_ст., где

Е_оп – экстинкция опытной пробы; Е_ст. – экстинкция стандартной пробы (за вычетом оптической плотности контрольной пробы); С_ст. – концентрация стандартного раствора 0,5 г/мл; 0,059 – коэффициент пересчета в единицы СИ; 10 – коэффициент пересчета на сыворотку.

Определение мочевой кислоты по методу Мюллера-Зейферта.

Принцип метода основан на колориметрировании окрашенных продуктов, образующихся при восстановлении фосфорновольфрамового реактива мочевой кислотой.

Реактивы.

Реактив Фолина.

3. Стандартный раствор мочевой кислоты. 100 мг мочевой кислоты помещают в колбу на 500 мл. Затем в нее добавляют 25 мл раствора углекислого лития… Из основного стандартного раствора (20 мг/100 мл) готовят рабочий раствор (2… 4. Насыщенный раствор углекислого натрия. 51,5 г Na2CO3 растворяют в мерной колбе на 500 мл.

Ход определения.

В центрифужную пробирку вносят 1,5 мл сыворотки, 1,5 мл дистиллированной воды и 1,5 мл ТХУ. Содержимое пробы тщательно перемешивают и через 30 мин центрифугируют. Дальнейший порядок работы показан в таблице.

Реактивы	Опыт	Стандарт
Центрифугат, соответствующий 0,5 мл сыворотки	1,5 мл	-
Стандартный рабочий раствор	-	0,5 мл
ТХУ	-	0,5 мл
Дист. вода	-	0,5 мл
Насыщенный раствор Na2CO3	0,7 мл	0,7 мл
Реактив Фолина	1 капля	1 капля

Пробы перемешивают и через 10 мин колориметрируют на ФЭКе при зеленом светофильтре в кювете с шириной слоя 5 мм, используя для сравнения дистиллированную воду.

Расчет производят по формуле:

С_х= (С_ст. • Е_оп.)/Е_ст., где

С_х – концентрация мочевой кислоты в сыворотке (мг/100 мл); С_ст. – концентрация мочевой кислоты в стандартной пробе; Е_оп. – оптическая плотность опытной пробы; Е_ст. – оптическая плотность стандартной пробы. При умножении С_х на 0,059 получают содержание МК в ммоль/л.

Определение содержания мочевой кислоты методом ультрафиолетовой фотометрии по Маримонт и Лондону.

Принцип метода основан на прямом измерении поглощения мочевой кислоты в узкой зоне (282-295 нм) с оценкой результатов по калибровочной кривой или по формуле.

 

Ход определения.

2. Концентрацию мочевой кислоты находят с помощью калибровочной кривой, для построения которой из основного стандарта (200 мг/мл) делается… Полученный раствор мочевой кислоты используется для приготовления рабочих…  

Нормальные величины

Влияющие факторы

Пища, богатая пуринами; диуретики, салицилаты, кортикостероиды, лекарственные вещества — производные пурина, фенола, гемолиз.

Клинико‑диагностическое значение

Определение концентрации мочевой кислоты имеет особое значение для диагностики начальных стадий поражения почек и подагры.

Сыворотка

Первичная гиперурикемия отмечается в связи с подагрой, связанной с увеличением эндогенного синтеза мочевой кислоты в результате нарушения обмена… Вторичная гиперурикемия сопровождает почечную недостаточность, выявляется при… Гипоурикемия отмечается при лимфогранулематозе, миеломной болезни, гепатоцеребральной дистрофии (синдром…

Моча

Увеличение содержания мочевой кислоты выявляется при подагре, лейкозах, вирусном гепатите, серповидноклеточной анемии, болезнь Вильсона‑Коновалова. Снижение — при ксантурии, дефиците фолиевой кислоты, свинцовой интоксикации.

Методы определения креатинина

  Креатинин Существующие методы определения концентрации креатинина делятся на следующие группы.

Унифицированным методом определения в сыворотке крови и моче является метод Поппера с соавт., основанный на реакции Яффе.

Определение концентрации креатинина в сыворотке крови методом Поппера

Ход этой реакции следующий: в щелочной среде креатинин ионизируется, и анион креатинина взаимодействует с пикриновой кислотой по механизму…   Надо отметить, что конечно-точечный вариант определения креатинина не всегда эффективен, так как продукт разлагается…

Нормальные величины

Влияющие факторы

Повышение содержания отмечается при употреблении мясной пищи и при усиленной физической работе. Ложное увеличение показателя может вызвать липемия и гемолиз, ложное снижение — желтуха.

Клинико‑диагностическое значение.

Сыворотка, плазма

Увеличение содержания креатинина в плазме (сыворотке) крови обусловлено как его усиленным образованием, так и задержкой этого метаболита в организме. Различают продукционную и ретенционную гиперкреатининемию.

Продукционная гиперкреатининемия отмечается при кишечной непроходимости, острой атрофии печени, декомпенсации деятельности сердечно-сосудистой системы, пневмонии, лихорадочных состояниях, изменении эндокринного баланса (акромегалии, гипертиреозе), а также при голодании и усиленной мышечной работе.

Ретенционная гиперкреатининемия обусловлена нарушением функции почек любого происхождения и обычно наблюдается при уменьшении клубочковой фильтрации, поражении паренхимы почек и др.

Гиперкреатининемию рассматривают как ранний показатель развивающейся недостаточности почек. Устойчивое повышение уровня креатинина в крови, как и возрастание концентрации мочевины в ней, указывает на нарушение функции почечного фильтра.

Гипокреатининемия отмечается при уменьшении мышечной массы, во время беременности (особенно I и II триместры).

Моча

Увеличение концентрации креатинина может быть связано с повышенной физической активностью, с лихорадочными состояниями, отмечается при выраженной недостаточности функции печени, при сахарном диабете, инфекциях. Снижение обнаруживается при голодании, у больных с мышечной атрофией, с дегенерацией и амилоидозом почек, лейкемией.

Амниотическая жидкость

Накопление креатинина выявляется при беременности больных сахарным диабетом, преэклампсии.

 

Методы определения молекул средней массы

Благодаря наличию в структуре СМП пептидных связей, циклических аминокислот, нуклеопептидов выделяют несколько фракций СМП по регистрации… - МСМ, содержащие ароматические аминокислоты (поглощение при 280 нм); - МСМ, не содержащие ароматических аминокислот (поглощение при 254 нм);

Модифицированный способ определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях.

Принцип методаоснован на осаждении высокомолекулярных белков плазмы крови действием хлорной кислоты и этилового спирта с последующей спектрофотометрией при 210 нм, 254 нм и 280 нм.

Реактивы

1.1,2 моль/л раствора хлорной кислоты (13,8 мл хлорной кислоты х.ч. довести дистиллированной водой до 100 мл.

 

2.2 моль/л раствора калия углекислого (К₂СО₃).

 

3.Этиловый спирт, 96% раствор.

 

Ход определения

2.Отбирают 0,5 мл центрифугата в чистую центрифужную пробирку, в которую добавляют 0,1 мл раствора К2СО3 (реактив 2). Пробирку выдерживают в ледяной… 3.Отбирают 0,2 мл надосадочной жидкости в чистую центрифужную пробирку,… 4.Отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости (центрифугата) и добавляют к ней 4,5 мл димтиллированной воды. Пробы…

Клинико-диагностическое значение.

Увеличение уровня МСМ в биологических жидкостях наблюдается при всех патологических состояниях, сопровождающихся эндогенной интоксикацией и…

Методы определения аминного азота

Для определения концентрации аминоазота применяют ряд методов: · формоловое титрование по Серенсену, основанное на титровании карбоксильных… · газометрическое определение – по выделению свободного азота при действии азотистой кислотой на первичные группы…

Определение свободного аминного азота в сыворотке крови (по методу Г.А.Узбекова в модификации З.С.Чулковой).

Принцип метода.Содержание аминоазота определяют колориметрически по интенсивности окрашивания комплекса, образующегося за счет взаимодействия аминогрупп с нингидриновым реактивом.

-Аминокислоты реагируют с нингидрином, образуя сине-фиолетовый комплекс (пурпур Руэманна), интенсивность окраски которого пропорциональна количеству аминокислоты. Реакция идет по схеме:

 

 

 

Реактивы.

1.0,04 Н раствор уксусной кислоты – 0,23 мл ледяной СН₃СООН на 100 мл воды.

2.Водный раствор нингидрина – 1г/100 мл.

 

Ход определения.

2.Фильтрование. К содержимому пробирок добавляют по 1 мл дистиллированной воды и после перемешивания растворов тонкой стеклянной палочкой производят… 3.Цветная реакция с нингидрином. К полученному фильтрату добавляют 0,5 мл… 4.Колометрия. Оптическую плотность измеряют на ФЭКе при зеленом светофильтре (длина волны – 536 нм) в кювете с…