Групу крові визначають за допомогою стандартних гемаглютинуючих сироваток, аглютиніни яких відомі, при доброму освітленні та температурі 20-25°С.
Для визначеня групи крові необхідні стандартні сироватки 0(І), А(ІІ), В(Ш) двох серій і АВ(ІУ) стандартна сироватка, їх ампули слід зберігати при температурі 4-6°С відповідно терміну зберігання; перед використанням ампули перевіряють - вміст має бути прозорий, без осаду. Відкриту ампулу можна зберігати 1 добу. Також потрібно мати тарілочку з поділками та позначенням усіх груп, ізотонічний розчин хлориду натрію, скляні палички, предметні скельця, піпетки.
Спочатку на тарілочку відповідно позначок наносять стандартні сироватки - по дві краплі кожної групи (двох різних серій). Кров вносять кутиком предметного скельця у стандартні сироватки та змішують. Кількість крові хворого має бути в 10 разів меншою від сироватки. Предмет для забору та змішування (предметне скельце, паличка) забороняється використовувати повторно. Тарілочку похитують 3 хв, після чого до кожної краплі додають одну краплю ізотонічного розчину, чекають ще 2 хв, періодично похитуючи тарілочку, після чого читають результат. Якщо аглютинація не наступила в жодній краплі, у хворого 0(І) група крові; якщо у хворого А(ІІ) або В(Ш) група, то аглютинація буде у всіх сироватках за винятком ідентичної групи. Якщо аглютинація відбулася у всіх стандартних сироватках, то досліджувана кров - АВ(ІУ) групи; тоді додатково перевіряють стандартною сироваткою АВ(ІУ) групи, з якою не повинна відбуватися аглютинація.
Визначення групи крові перехресним методом (подвійною реакцією)
Визначення групи крові базується на паралельному визначенні наявності або відсутності групових антигенів на еритроцитах і групових аглютинінів у сироватці досліджуваної крові. Відповідно позначок груп крові наносять у два ряди по великій краплі стандартних сироваток двох серій. Нижче сироваток наносять два ряди стандартних еритроцитів двох серій. Сироватку досліджуваної крові наносять піпеткою по великій краплі на кожну краплю стандартних еритроцитів. У стандартні сироватки вносять маленькі краплі досліджуваних еритроцитів. Усі краплі перемішують, планшет періодично погойдують і спостерігають за появою аглютинації. Результати можуть бути наступними:
О(І) група – аглютинації зі стандартним сироватками не відбулося, аглютинація відбулася з еритроцитами А(ІІ) і В(ІІІ);
А(ІІ) група – аглютинація з стандартними сироватками І-ї і ІІІ-ї груп та стандартними еритроцитами В(ІІІ);
В(ІІІ) група – аглютинація з стандартними сироватками І-ї і ІІ-ї груп та стандартним еритроцитами А(ІІ);
АВ(ІV) группа –аглютинація з усіма стандартними сироватками і відсутність аглютинації зі стандартними еритроцитами.