А. Реакция агглютинации на плоскости при участии цоликлона анти-Д Эта реакция проводится также как в пункте 1, только ещё проводится контрольная проба с раствором высокомолекулярного вещества (альбумина или полиглюкина). Если эти вещества вызывают сами по себе агглютинацию, то результаты недостоверны.
Б. Реакция конагглютинации в присутствии желатина
Ход работы.В пробирку помещают 0,05 мл исследуемой крови и добавляют 2 капли (0,1мл) 10% раствора желатина, предварительно подогретого на спиртовке до жидкого состояния, затем ещё 2 капли (0,1мл) реагента анти-D. Смешивают, помещают пробирку в водяную баню при температуре 37оС на 10 минут.
После инкубации доливают в пробирку 5-8 мл физиологического раствора и, осторожно переворачивая 1-2 раза, перемешивают содержимое пробирки. Оценка агглютинации производится на свет невооружённым глазом или с лупой. Эту пробу проводят с параллельным контрольным определением:
1 - со стандартными Rh+ эритроцитами,
2 - со стандартными Rh- эритроцитами,
3 - с исследуемыми эритроцитами и желатином без анти-D антител.
Рекомендации к оформлению работы.Если в пробирке нет агрегатов, а видна равномерно окрашенная взвесью эритроцитов жидкость, кровь является резус-отрицательной, при резус-положительной крови наблюдаются четко различимые агрегаты различной величины. Результаты пробы считаются достоверными, если желатин не вызывает агглютинацию, а результаты других контрольных проб соответствуют ожидаемым. Если же желатин вызывает агглютинацию сам по себе, следует предположить наличие антиэритроцитарных антител анти-Rh или другой специфичности, что может быть при гемолитической болезни новорожденных, аутоиммунной гемолитической анемии и некоторых инфекционных заболеваниях. В этих случаях кровь направляется в серологическую лабораторию. При мелкозернистой (сомнительной) агглютинации требуется дальнейшее дополнительное исследование.
Занятие 4
СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ
Цель занятия. Проанализировать механизмы свертывания крови и фибринолиза. Познакомиться с основными экспресс-методами их исследования.