Точность измерения массы

Точность измерения массы определяется как разность между измеренной и расчетной массами иона. Она выражается в процентах от измеренной массы (например, молекулярная масса = 10 000 ± 0.01%) или в долях на миллион (например, молекулярная масса = 10 000 ± 100 миллионных долей). По мере увеличения массы абсолютная ошибка в процентах или в миллионных долях также будет пропорционально увеличиваться.

Обычно для точного измерения массы не требуется максимального разрешения, если наблюдаемый сигнал для данной массы связан только с одним типом молекул. Основным фактором, ограничивающим такую точность для больших биологических макромолекул, является перекрывание пиков. Однако в подходящих условиях, когда ионы образца полностью отделены от фоновых ионов, измерения, сравнимые по точности, могут быть сделаны и при более низком разрешении.

 

 

Рис. 7.5. Кластер молекулярных ионов для окисленной β-цепи инсулина (формула C₉₇H₁₅₁N₂₅O₄₆S₄^, расчетная масса 2531,64 Да), показанный с различным разрешением. Асимметрия кластера становится менее очевидной по мере уменьшения разрешения, при этом масса наибольшего пика и средняя масса становятся практически идентичными

 

Соотношения между моноизотопной, средней массой и массой наибольшего пика показаны на рисунках 7.5 и 7.6 для белков с массами 2500 и 25 000 при различном разрешении. Важным следствием вклада пиков тяжелого изотопа является то, что для пептидов с массой больше чем 2000 Да, пик, соответствующий моноизотопной массе, более не является преобладающим в изотопном кластере (рис. 7.6).

С повышением молекулярной массы самый большой пик сдвигается по отношению к пику моноизотопной массы. При значениях масс выше 8000 Да вклад моноизотопной массы в спектр становится пренебрежительно малым (рис. 7.6). Использование той или иной массы для характеристики образца зависит от массы вещества и разрешающей способности масс-спектрометра.

Рис. 7.6. Молекулярный ионный кластер белка вируса иммунодиффицита человека HIV-p24 (формула C₁₁₂₉H₁₈₀₂N₃₁₆S₁₃), показанный с различным разрешением. Положение моноизотопоной массы обозначено стрелкой