Влияние температуры и рН на активность фермента. Нами была поставлена цель определить рН и температурные оптимумы действия выделенных протеиназ Penicillium wortmannii 2091 и дать их сравнительную характеристику. Нужное значение рН субстрата поддерживали с помощью 0,1М универсального буфера.
Гидролиз вели при температуре 30оС в течение 30 минут. Ферментативную активность определяли стандартным методом 12 . Как видно на рис.2, препарат проявляет определённую активность в широкой зоне рН. Однако максимум активности наблюдается при различных значениях рН. Протеиназа 1 имеет оптимальное значение рН 7,2, в то время как протеиназа 2 - 10,0. Таким образом, протеиназа 1 имеет нейтральную природу, а протеиназа 2 - щелочную. Температурный оптимум действия ферментов определяли в интервале температур 30 - 80оС при оптимальных значениях рН 7,2 и 10,0. На рис.3 показано влияние температуры на активность ферментов.
Для протеиназы 1 максимальный гидролиз наблюдается при температуре 60оС, а протеиназы 2 - 40оС. Таким образом, протеолитический комплекс Penicillium wortmannii 2091 представлен двумя ферментами, имеющими различные температурные и рН - оптимумы. 3.4 Определение молекулярной массы. Молекулярную массу ферментов Penicillium wortmannii 2091 определяли методом гель-фильтрации на сефадексе У-100 8 . Установлено, что соотношение объёма элюента, необходимого для выноса исследуемого белка из колонки V - объём элюента и объёма элюата, размещающемся в свободном не занятом гранулами сефадекса пространстве колонки V0 - свободный объём, обратно пропорционально величине молекулярной массы белка. Для расчёта использовали формулу LgM 5,941-0,847 V V0 Молекулярная масса протеиназы 1 оказалась равной 34500, протеиназы 2 - 20800, т.е. обе фракции относятся к низкомолекулярным белкам. 3.5