Количественное определение белка в моче колориметрическим методом с пирогаллоловым красным.

Принцип метода: при взаимодействии белка с пирогаллоловым красным и молибдатом натрия образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски, которого пропорциональна концентрации белка в пробе.

Реактивы: Рабочий реагент – раствор пирогаллолового красного в сукцинат-ном буфере, калибровочный раствор белка с концентрацией 0,50 г/л

Ход работы:

Отмерить	Моча	Калибратор	Вода дист.
Моча	20 мкл	─	─
Калибратор	─	20 мкл	─
Вода дист.	─	─	20 мкл
Рабочий реагент	1000 мкл	1000 мкл	1000 мкл

Пробы перемешать, выдержать 10 мин. при комнатной температуре (18 -25ºС). Измерить оптическую плотность опытной (D_оп) и калибровочной пробы (D_к) против контрольной пробы при λ=598 (578-610) нм. Окраска стабильна в течении 1 ч.

Расчет: концентрацию белка в моче (С) г/л рассчитать по формуле:

С= D_оп/D_к×0,50

 

где: D_оп = D_к= C = г/л.

Нормальные величины: до 0,094 г/л, (0,141 г/сут)

Вывод:

 

 

Количественное определение глюкозы в моче

глюкозооксидазным методом.

Принцип метода: При окислении D-глюкозы кислородом воздуха под действием глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты (смесь фенола и 4 аминоантипирина - 4ААП) с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы.

глюкозооксидаза

Глюкоза + О₂ + Н₂О глюконолактон + Н₂О₂

пероксидаза

2 Н₂О₂ + фенол + 4ААП окрашенное соединение + 4Н₂О

Ход работы: в две пробирки вносят по 1 мл рабочего раствора и по 0,5 мл фосфатного буфера. В первую пробирку добавляют 0,02 мл мочи, во вторую – 0,02 мл калибратора (калибровочный, стандартный раствор глюкозы, 10 ммоль/л). Пробы перемешивают, выдерживают 15 мин при температуре 37⁰С в термостате и измеряют оптическую плотность опытной (D_оп) и калиб-ровочной (D_к) проб против рабочего реагента при длине волны 500-546 нм.

 

Расчет: С = D_оп/D_к · 10 ммоль/л D_оп= D_к =

С =

 

Содержание глюкозы в суточной моче ммоль/сутки определяют, умножая полученный результат на объем собранной за сутки мочи.

Вывод:

Примечание. При содержании сахара в моче более 1% ее необходимо разводить.

В настоящее время в биохимических лабораториях используется унифи-цированный экспресс-метод анализа мочи на глюкозу с помощью реактив-ной бумаги на глюкозу ²Глюкотест² или с использованием комбиниро-ванных тест-полосок на РН, белок, глюкозу, кетоновые тела и кровь. Тест-полоски, опускают в сосуд с мочой на 1сек. и сравнивают окраску по шкале.

Тестовый контроль по теме: ²Физико-химические свойства, нормальные и патологические компоненты мочи, качественный и количественный анализ патологических компонентов мочи².

Тест 1

Выберите правильный ответ

Глюкоза в крови в пределах нормы, в моче проба на глюкозу положительна. Это объясняется нарушением в почках процесса:

а) фильтрации

б) секреции

в) реабсорбции

г) концентрирования

д) разведения

Тест 2

Выберите правильный ответ

Повышение содержания аммонийных солей и снижение количества мочевины в моче происходит при заболевании:

а) печени б) сердца в) почки

г) мочевого пузыря д) тонкого кишечника

Тест 3

Выберите ВСЕ правильнЫе ответы

Кетонурия наблюдается при:

а) сахарном диабете

б) заболевании печени

в) углеводном голодании

г) несахарном диабете

д) заболевании почек

Тест 4

Выберитеь все правильные ответы

Кровь в форме красных кровяных клеток появляется в моче вследствие:

а) воспалительного процесса в нефроне

б) воспалительного процесса мочевых путей

в) травмы мочевыводящих путей

г) воспалительного процесса в селезенке

д) гемолиза эритроцитов

Тест 5

Выберите все правильные ответы

Появление прямого билирубина и уробилиногена в моче наблюдается:

а) гепатите

б) обтурационной желтухе

в) заболевании почек

г) гемолитической желтухе

д) заболевании селезенки

Тест 6

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ

Понижение плотности мочи наблюдается при:

а) полиурии

б) олигурии

в) протеинурии

г) снижении фильтрации

д) глюкозурии

Тест 7

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ

Полиурия наблюдается при:

а) диарее

б) сахарном диабете

в) заболевании печени

г) несахарном диабете

д) мочекаменной болезни

Тест 8

Выберите все правильные ответы

Патологические компоненты мочи:

а) β-оксимасляная кислота

б) ацетоуксусная кислота

в) мочевая кислота

г) гиппуровая кислота

д) порфирины

Тест 9