Практически дисахариды извлекают из природных источников в виде гликозидов. Некоторые из них могут быть получены путем неполного гидролиза полисахаридов. Природные источники являются в настоящее время важнейшими для получения дисахаридов. Выделение индивидуальных дисахаридов представляет довольно сложную задачу. Для извлечения дисахаридов из природного материала обычно прибегают к водной экстракции. Для разделения смеси моно- и дисахаридов используют методы, основанные на хроматографии. Синтезы дисахаридов представляют главным образом теоретический интерес, с их помощью подтверждается строение биоз. Энзиматические синтезы дисахаридов осуществляются путем реакций трансгликозилирования.