Лиза нуклеопротеидов (белки, углеводы, пуриновые основания, фосфат).

 

Принцип метода. Основан на проведении специфических реакций на ком-поненты нуклеопротеидов дрожжей, получаемых путем их гидролиза: поли-пептиды, пуриновые основания, углеводы и фосфат.

 

ВНИМАНИЕ! Соблюдать меры безопасности при работе с концентри-рованной серной кислотой и кипячением на водяной бане.

 

Ход работы.

 

а) Биуретовая реакция на полипептиды.

 

К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 %-го раствора NaOH, затем

3 капли 1 %-го раствора CuSO₄. Образуется комплекс фиолетового цвета.

 

б) Серебряная проба на пуриновые основания.

 

К 10 каплям гидролизата приливают 10 капель концентрированного (!) ам-миака, затем добавляют 10 капель 2 %-го аммиачного раствора нитрата се-ребра. При стоянии через 3–5 мин образуется светло-коричневый осадок се-ребряных солей пуриновых оснований (см. уравнение).

O

O

HN

N

+ AgNO3

HN

N

+NH4NO3

N

N

+NH4OH

N

N

+H2O

H2N

H2N

H

Ag

в) Качественная реакция на пентозу (Молиша).

 

К 5 каплям гидролизата добавляют 3 капли 1 %-го спиртового раствора ти-мола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно наслаивают 20 капель концентрированной (!) серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется продукт конденсации фурфурола с тимолом красного цвета (см. уравнение).

 

г) Качественная реакция на углеводы.

 

К 5 каплям гидролизата дрожжей приливают 3 капли 0,2 %-го спиртового раствора альфа-нафтола и 20 капель концентрированной (!) серной кислоты. Наблюдают появление розово-фиолетового окрашивания.

 

д) Реакция на дезоксирибозу и рибозу.

 

К 5 каплям гидролизата дрожжей добавляют 20 капель 1%-го раствора ди-фениламина и кипятят на водяной бане в течение 15 мин, при этом образует-ся сине-зеленое окрашивание, поскольку дифениламин с дезоксирибозой да-ет синее окрашивание, а с рибозой – зеленое.

 

е) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

 

К 10 каплям гидролизата дрожжей приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят несколько минут на открытом огне спиртовки. При этом жидкость окрашивается в желтый цвет. Пробирку сразу охлаждают в струе холодной воды. На дне пробирки появляется кристаллический лимонно-желтый осадок фосфорномолибденовокислого аммония.

 

Порядок оформления работы. Результаты лабораторной работы записы-вают в тетрадь в виде таблицы:

 

 

Открываемое	Используемые	Продукты	Чем обусловлена
соединение	реактивы	реакции	реакция?

 

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности-ческую оценку.

 

_________________________________________________________________

_________________________________________________________________

 

_________________________________________________________________