Принцип метода. Общий билирубин определяется на основе реакции диазо-тированной сульфаниловой кислотой, после диссоциации неконъюгированно-го (непрямого, свободного билирубина) при участии кофеинового реагента.
Ход работы. Составляют реакционную смесь по схеме:
| РЕАГЕНТЫ | Опытная проба, мл. |
| Сыворотка крови | 0,2 |
| Кофеиновый реагент | 1,4 |
| Физ. раствор | 0,2 |
| Диазосмесь | 0,2 |
Время инкубации после добавления диазосмеси составляет 20 минут при температуре 200С. Измеряют экстинкцию опытной пробы против дистилли-рованной воды в кюветах с длиной оптического пути 5 мм на ФЭКе при дли-не волны 535 нм.
Расчет производят по калибровочному графику.
Норма: 0,5 – 1,1 мг %
8,5 – 20,5 мкмоль/л.
Клинико-диагностическое значение. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада в клетках ретикулоэндотелиальной систе-
мы (печень, селезенка) гемоглобина и других гемопротеидов (цитохромы, ка-талаза и др.). Билирубин относится к группе желчных пигментов, является токсическим веществом и обезвреживается в гепатоцитах. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени проис-ходит процесс обезвреживания по схеме
УДФ-глюкуроновая кислота
Билирубин ¾¾¾¾¾¾¾¾¾¾® Билирубин-глюкуронид.
глюкуронилтрансфераза
Образующиеся при этом глюкурониды билирубина хорошо растворимы в воде, секретируются в просвет желчного капилляра и выводятся из организма по желчевыводящим путям.
В сыворотке крови содержится две фракции билирубина, вместе состав-ляющие "общий" билирубин:
- неконъюгированный (непрямой, токсичный, свободный, водонераствори-мый, существует в виде комплекса с альбумином),
- конъюгированный (билирубин глюкуронид, прямой, нетоксичный, связан-ный, водорастворимый).
Содержание билирубина в крови в норме составляет 0,5–1,2 мг% (8,5– 20,5 мкмоль/л в единицах СИ), причем 75 % приходится на долю неконъюги-рованного. Определение его уровня в крови является важным диагностиче-ским тестом. Так, при различных поражениях печени и желтухах часто на-блюдается гипербилирубинемия – увеличение концентрации билирубина до
30–35 мг% (512,5 – 600,0 мкмоль/л) и более.
Дифференциальная диагностика различных видов желтух осуществляется на основании исследования содержания фракций билирубина в крови, а так-же особенностей клинического течения заболевания и др.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности-ческую оценку.
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________