Принцип метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильно-кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного желе-за комплекс красного цвета, интенсивность окраски которого пропорцио-нальна содержанию мочевины.
Меры предосторожности по ходу работы. Обращаться с осторожностью,
т. к. реактив 2 содержит ядовитое вещество тиосемикарбазид, а в рабочем растворе содержится серная кислота.
Ход работы. Осуществляется в соответствии с таблицей 1.
Таблица 1
| Реагент | Проба | Эталон | Контр. рас- |
| твор | |||
| Сыворотка или разведенная | 0,01 | - | - |
| моча | |||
| Реактив 1 | - | 0,01 | - |
| Дистиллированная вода | - | - | 0,01 |
| Реактив 2 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
В пробирку отмеривают 0,01 мл сыворотки крови или разведенной мочи, добавляют 2 мл рабочего раствора (реактива 2), содержащего смесь раствор диацетилмонооксима, тиосемикарбазида и хлорида железа в кислой среде.
Эталонную пробу обрабатывают точно так же, используя вместо 0,01 мл сыворотки крови 0,01 мл эталонного раствора мочевины (реактива 1).
Содержимое пробирок тщательно перемешивают, пробирки закрывают алюминиевой фольгой и помещают точно (!) на 10 мин в кипящую баню.
Затем пробирки быстро охлаждают в токе холодной воды и не позднее (!) 15 мин после охлаждения, измеряют оптическую плотность пробы (A1) и эта-
лона (A2) против контрольного раствора (реактив 2) в кювете 10 мм при дли-не волны 490–540 нм (зеленый светофильтр).
Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1 : 100, а результат умножается на коэффициент разведения.
Расчет:
[Мочевина] = 16,65(А1/А2)(моль/л).
Норма. 2,5–8,3 ммоль/л.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности-ческую оценку.
Предупреждение. При содержании мочевины в пробе свыше 23 ммоль/л пробу следует развести дистиллированной водой, анализ провести повторно, а полученный результат умножить на коэффициент разведения.
При определении мочевины в гемолитических или липемических сыворот-ках пробу необходимо депротеинировать 5 %-ным раствором ТХУ. Для этого в пробирке смешивают 0,1 мл пробы с 1 мл раствора ТХУ и центрифугируют. Точно так же разбавляют и эталонный раствор мочевины. Для собственно анализа отмеривают 0,1 мл надосадочной жидкости. Далее определение про-водят как при анализе без депротеинирования. Таким же способом можно анализировать цельную кровь.
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________