Кислоты в биологических жидкостях энзиматическим колориметриче-ским методом без депротеинизации

 

Принцип метода. Содержащаяся в пробе мочевая кислота окисляется под действием фермента уриказы с образованием эквимолярного количества пе-рекиси водорода. В присутствии пероксидазы перекись водорода окисляет хромогены с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты в пробе.

 

уриказа

мочевая кислота + 2Н₂О + О₂ —→ аллантоин + СО₂ + Н₂О₂

 

пероксидаза

2Н₂О₂ + ДХФС¹ + ААП² ——→ (хинониминовый окрашенный продукт) + 4Н₂О

 

Ход работы. Осуществляется в соответствии с таблицей 1. Таблица 1.

 

РЕАКТИВЫ	Опытная проба, мл	Калибровочная проба,
	мл
Рабочий реагент	2,0	2,0
Калибратор	-	0,05
Сыворотка крови	0,05	-

 

Содержимое опытной пробы перемешивают и инкубируют в термостате при температуре 20-25C не менее 10 минут. Затем опытную пробу фотомет-рируют при длине волны 490 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 0,5 см против дистиллированной воды.

 

¹ 3,5-дихлоро-2-фенолсульфонат

² 4-аминоантипирин

Примечание: Окраска стабильна не менее 40 минут после окончания инкуба-ции.

 

Расчёт производят по формуле:

С = Е_пр / Е_кал • 357 (мкмоль/л) или

С = Е_пр / Е_кал • 6 мг/100 мл

где Е_пр – экстинкция опытной пробы,

Е_кал – экстинкция калибровочной пробы,

 

357 или 6 – концентрация мочевой кислоты в калибраторе в мкмоль/л

или мг/100мл

Норма: женщины – 142-339 мкмоль/л (2,4-5,7 мг/100 мл),

мужчины – 202-416 мкмоль/л (3,4-7,0 мг/100 мл.

 

Клинико-диагностическое значение.

 

Увеличение уровня мочевой кислоты в крови (гиперурикемия) отмечается при патологических состояниях, связанных с усилением распада клеток (в особенности содержащих ядра), нарушением выделения мочевой кислоты с мочой, изменением эндокринной регуляции обмена пуриновых оснований (вторичные гиперурикемии), а также при подагре – заболевании, обуслов-ленном первичным (вызванным врожденными ферментативными сдвигами метаболизма) нарушением обмена этого метаболита.

 

Гипоурикемия (уменьшение концентрации этого метаболита) наблюдается при гепатоцеребральной дистрофии (болезни Вильсона-Коновалова), некото-рых злокачественных новообразованиях (лимфогранулематозе, бронхоген-ном раке), у больных после приема пиперазина, атофана, салицилатов и кор-тикотропина (АКТГ).

 

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

 

_________________________________________________________________

_________________________________________________________________

 

_________________________________________________________________

 

Л а б о р а т о р н а я р а б о т а Качественные реакции на продукты гидро-