Биотехнология и медицина

Биотехнология и медицина. Нет такого экспериментального подхода или исследовательского направления в биотехнологии, которые бы не получили применения в медицине.

Вот почему столь многообразны связи между биотехнологией и самой гуманной из всех наук. Здесь мы остановимся лишь на основных моментах. Антибиотики. Антибиотики - это специфические продукты жизнедеятельности, обладающие высокой физиологической активностью по отношению к определенным группам микроорганизмов и к злокачественным опухолям, избирательно задерживающих их рост или полностью подавляющих развитие Н. С. Егоров, 1979 . Далеко не все из этих соединений, число которых приближается к 5000, допущены для применения в медицине.

К важнейшим антибиотикам терапевтического назначения принадлежат следующие их классы табл. 2 . Приведенные классы антибиотиков не исчерпывают их многообразия, список их пополняется с каждым годом. Причины неослабевающего внимания к поиску новых антибиотиков, как видно из табл. 10, связаны с токсичностью существующих антибиотиков, аллергическими реакциями, вызываемыми ими, нарастанием устойчивости патогенных микроорганизмов к применяемым препаратам и, помимо этого, с необходимостью изыскания средств борьбы с возбудителями, против которых недостаточно эффективны известные ныне антибиотики.

Основные пути поиска включают 1. Испытание новых продуцентов. Так, с начала 80-х годов исследуют миксобактерии, продуцирующие большое количество антимикробных агентов Н. Thierbach, N. Reichenbach, 1981 . 2. Химическая модификация антибиотиков.

Противомикроб-ные макролиды токсичны для человека. Например, гептаен амфо-терицин В, используемый по жизненным показаниям при тяжелых микозах, вызывает необратимые поражения почек. Получены метиловые эфиры амфотерицина, менее токсичные и сохраняющие противогрибковую активность. При модификации пенициллинов и цефалоспоринов используют иммобилизованные ферменты. Таблица 2. Важнейшие классы антибиотиков терапевтического назначения по И Г Егорову, 1979 Д.Ланчини, Ф Паренти, 1985 Класс Типичные антибиотики Продуценты На кого действует Механизм действии Трудности терапевтического применения b-Лактамные Пенициллины, це-фалоспорины Грибы родов Реnicillium, Cephalosporum Грамположитель-ные и грамотрицательные бактерии Нарушение синтеза клеточной стенки Аллергические реакции Аминогликозидные Стрептомицин, гентамицин, канамицин, тобрамицин, амикацин Актиномицеты рода Streptomyces, бактерии родов Micromonospora.

Bacillus В основном грамотрицательные бактерии Необратимое подавление синтеза белка Токсическое действие на слуховой нерв и почки Тетрациклины Одноименные антибиотики Актиномицеты рода Streptomyces Грамположительные и грамотрицательные бактерии, риккетсии, хламидии, простейшие Обратимое подавление синтеза белка Распространение устойчивых штаммов Макролиды Антибактериальные эритромицин Противогрибковые и антипротозойные полиены Актиномицеты рода Streptomyces То же Грамположительные бактерии Грибы, некоторые простейшие То же Нарушение плазматической мембраны Токсичность Полипептидные и депсипептидные Полимиксины, грамицидины, бацитрацины Различные микро-организмы В основном грамотрицательные бактерии Механизм действия различен Высокая токсичность 3. Мутасинтез.

Применяют мутантные штаммы, у которых блокирован синтез отдельных фрагментов молекулы антибиотика. В среду культивирования вносят аналоги этих фрагментов.

Микроорганизм использует эти аналоги для биосинтеза, в результате чего получают модифицированный антибиотик. 4. Клеточная инженерия.

Получают гибридные антибиотики, например, с новыми комбинациями агликона и Сахаров. 5. Генетическая инженерия - введение в геном микроорганизма информации о ферменте, необходимом для модификации продуцируемого антибиотика, например его метилирования при помощи метилаз. Важной задачей является повышение эффективности биосинтеза известных антибиотиков. Значительных результатов удалось добиться за десятилетия селекции штаммов-продуцентов с применением индуцированного мутагенеза и ступенчатого отбора.

Например, продуктивность штаммов Penicillium по синтезу пенициллина увеличена в 300-350 раз. Определенные перспективы открываются в связи с возможностью клонирования генов узких мест биосинтеза антибиотика или в случае, если все биосинтетические ферменты кодируются единым опероном. Многообещающим подходом служит инкапсулирование антибиотиков, в частности их включение в лигюсомы, что позволяет прицельно доставлять препарат только к определенным органам и тканям, повышает его эффективность и снижает побочное действие.

Этот подход применим и для других лекарственных препаратов. Например, кала-азар, болезнь, вызываемая лейгшма-нией, поддается лечению препаратами сурьмы. Однако лечебная доза этих препаратов токсична для человека. В составе липосом препараты сурьмы избирательно доставляются к органам, пораженным лейшманией селезенке и печени.

Вместо антибиотика в организм человека может вводиться его продуцент, антагонист возбудителя заболевания. Этот подход берет начало с работ И. И.Мечникова о подавлении гнилостной микрофлоры в толстом кишечнике человека посредством молочнокислых бактерий. Важную роль в возникновении кариеса зубов, по-видимому, играет обитающая во рту бактерия Streptococcus mutans, которая выделяет кислоты, разрушающие зубную эмаль и дентин. Получен мутант Strept. mutans, который при введении в ротовую полость почти не образует коррозивных кислот, вытесняет дикий патогенный штамм и выделяет летальный для него белковый продукт.

Гормоны. Биотехнология предоставляет медицине новые пути получения ценных гормональных препаратов. Особенно большие сдвиги произошли в последние годы в направлении синтеза пеп-тидных гормонов. Раньше гормоны получали из органов и тканей животных и человека крови доноров, удаленных при операциях органов, трупного материала. Требовалось много материала для получения небольшого количества продукта.

Так, человеческий гормон роста соматотропин получали из гипофиза человека, каждый гипофиз содержит его не более 4 мг. В то же время для лечения одного ребенка, страдающего карликовостью, требуется около 7 мг соматотропина в неделю курс лечения должен продолжаться несколько лет. С применением генноинже-нерного штамма Е. coli в настоящее время получают до 100 мг гормона роста на 1 л среды культивирования. Открываются перспективы борьбы не только с карликовостью, но и с низкорос-лостью - более слабой степенью дефицита соматотропина.

Соматотропин способствует заживлению ран и ожогов, наряду с каль-цитонином гормоном щитовидной железы регулирует обмен Са2 в костной ткани. Инсулин, пептидный гормон островков Лангерганса поджелудочной железы, представляет основное средство лечения при сахарном диабете. Эта болезнь вызвана дефицитом инсулина и проявляется повышением уровня глюкозы в крови. До недавнего времени инсулин получали из поджелудочной железы быка и свиньи.

Препарат отличался от человеческого инсулина 1-3 аминокислотными заменами, так что возникала угроза аллергических реакций, особенно у детей. Широкомасштабное терапевтическое применение инсулина сдерживалось его высокой стоимостью и ограниченностью ресурсов. Путем химической модификации инсулин из животных удалось сделать неотличимым от человеческого, но это означало дополнительное удорожание продукта. Компания Eli Lilly с 1982 г. производит генноинженерный инсулин на основе раздельного синтеза Е. coli его А- и В-цепей.

Стоимость продукта значительно снизилась, получаемый инсулин идентичен человеческому. С 1980 г. в печати имеются сообщения о клонировании у Е. сой гена проинсулина - предшественника гормона, переходящего в зрелую форму при ограниченном протеолизе. К лечению диабета приложена также технология инкапсули-рования клетки поджелудочной железы в капсуле, введенные однократно в организм больного, продуцируют инсулин в течение года. Компания Integrated Genetics приступила к выпуску фолли-кулостимулирующего и лютенизирующего гормонов.

Эти пептиды составлены из двух субъединиц. На повестке дня вопрос о промышленном синтезе олигопептидных гормонов нервной системы - энкефалинов, построенных из 5 аминокислотных остатков, и эндорфинов, аналогов морфина. При рациональном применении эти пептиды снимают болевые ощущения, создают хорошее настроение, повышают работоспособность, концентрируют внимание, улучшают память, приводят в порядок режим сна и бодрствования.

Примером успешного применения методов генетической инженерии может служить синтез р-эндорфина по технологии гибридных белков, описанной выше для другого пептидного гормона, соматостатина. Значителен вклад биотехнологии и в промышленное производство непептидных гормонов, в первую очередь стероидов. Методы микробиологической трансформации позволили резко сократить число этапов химического синтеза кортизона, гормона надпочечников, применяемого для лечения ревматоидного артрита. При производстве стероидных гормонов широко используют иммобилизованные микробные клетки, например Arthrobacter globiformis, для синтеза преднизолона из гидрокортизона.

Имеются разработки по получению гормона щитовидной железы тироксина из микроводорослей. Интерфероны, интерлейкины, факторы крови. Интерфероны выделяются клетками человека и животных в ответ на инфици-рование вирусами. Они обладают антивирусной активностью. Механизм действия интерферонов до конца не выяснен.

Предполагается, в частности, что Интерфероны препятствуют проникновению вирусных частиц в клетку. Интерфероны стимулируют деятельность иммунной системы и препятствуют размножению клеток раковых опухолей. Все аспекты действия интерферонов важны с точки зрения их терапевтического применения. Различают a b g- и -интерфероны, образуемые соответственно лейкоцитами, фибробластами соединительной ткани, Т-лимфоцитами и эпителиальными клетками. Наибольшее значение имеют первые три группы.

Интерфероны состоят из 146-166 аминокислотных остатков, b - и g-интерфероны связаны с остатками Сахаров гликозилированы. До введения методов генетической инженерии интерфероны получали из донорской крови - до 1 мкг неочищенного интерферона из 1 л крови, т. е. примерно одну дозу для инъекции. В настоящее время a b- и g-интерфероны успешно получают с применением генноинженерных штаммов Е. coli, дрожжей, культивируемых клеток насекомых Drosophila и млекопитающих. Генно-инженерные интерфероны могут быть очищены с использованием моноклональных антител.

В случае у- и р-интерферонов предпочтительно применение эукариотических продуцентов, так как прокариоты не гликозилируют белки. Некоторые фирмы, например Bioferon ФРГ , используют не генноинженерные мутанты, а культивируемые in vitro фибропласты человека. Интерфероны используются для лечения болезней, вызываемых вирусами герпеса, бешенства, гепатитов, цитомегаловиру-сом, вирусом, вызывающим опасное поражение сердца, а также для профилактики вирусных инфекций.

Вдыхание аэрозоля интерферонов позволяет предупредить развитие острых респираторных заболеваний. Несколько курьезной проблемой является то что интерфероны, в частности a-интерфероны, сами могут вызывать у пациентов простудные симптомы насморк, повышение температуры и т.д Проблема побочного действия стоит особенно остро при длительном терапевтическом применении интерферонов, необходимом для лечения злокачественных опухолей. Интерфероны оказывают лечебное воздействие на организм больных раком груди, кожи, гортани, легких, мозга, рассеянной миеломе и саркоме Капоци - два последних заболевания характерны для лиц, страдающих приобретенными иммунодефицитами см. ниже. Интерфероны полезны также при лечении рассеянного склероза. Методы генетической инженерии позволяют получать модифицированные Интерфероны.

Антивирусная активность интерферонов варьирует при аминокислотных заменах J. Werenne, 1983 . Американская компания Cetus Corporation производит b-интер-ферон, в аминокислотной последовательности которого цистеин в положении 17 замещен на серии.

Это приводит к повышению терапевтической активности препарата, так как предотвращает наблюдаемое in vitro формирование неактивного димера b-интер-ферона за счет дисульфидных связей между остатками цистеина в положении 17. Определенные надежды возлагают на модификацию интерферонов путем получения гибридных молекул Е. Д. Свердлов, 1984 . Интерлейкины-сравнительно короткие около 150 аминокислотных остатков полипептиды, участвующие в организации иммунного ответа.

Интерлейкин-1, образующийся определенной группой лейкоцитов крови - макрофагами, в ответ на введение антигена стимулирует размножение пролиферацию Т-хелперов субпопуляции Т-лимфоцитов, продуцирующих, в свою очередь, интерлейкин-2. Последний вызывает пролиферацию различных субпопуляций Т-лимфоцитов - Т-киллеров, Т-хелперов, Т-супрессоров, а также В-лимфоцитов, продуцентов антител. Под влиянием интерлейкина-2 из Т-лимфоцитов высвобождаются регуляторные белки - лимфокины, активирующие звенья иммунной системы синтезируются также Интерфероны.

Интерлейкины, основные лечебные средства при иммунных расстройствах, получают путем клонирования соответствующих генов в Е. coll или культивирования лимфоцитов in vitro. Английская компания Celltech Ltd и японская Sakyo Company предлагают синтезированный генноинженерными бактериями интерлей-кин-1 наряду с другим тюлипептидным агентом -фактором некроза опухолей для лечения ряда опухолевых заболеваний В. Sikyta el al 1986 . Получаемые биотехнологическим путем факторы свертывания крови, особенно фактор VIII с помощью культивируемых клеток млекопитающих и фактор IX с помощью генноинженер-ного штамма Е. coli, необходимы для терапии форм гемофилии наследственной болезни, при которой кровь теряет способность свертываться. К числу ценных с клинической точки зрения факторов, полученных в биореакторах с культурами животных клеток, следует отнести фактор роста В-лимфоцитов, фактор активации макрофагов, Т-заместительный фактор, активатор тканевого плазминогена.