ОГЛАВЛЕНИЕ Введение 1. Виды культур клеток 2. Питательные среды 3. Получение клеточных культур 9-1. Приготовление первичных клеточных культур 2. Получение монослойных перевиваемых культур клеток 3. Роллерное культивирование клеток 4. Суспензионное культивирование клеток 5. Культивирование клеток на микроносителях 4. Выращивание вирусов в культурах клеток 19-24 4.1. Предосторожности при работе с зараженными вирусами клетками 2. Обнаружение вирусов 3. Культивирование пикорнавирусов на примере получения полиовируса типа 3 в культуре клеток HeLa 24 Список литературы 25 ВВЕДЕНИЕ Для количественного накопления вирусов наиболее удобную систему представляют культуры клеток. Первые попытки культивирования клеток животных вне организма относятся к концу прошлого столетия. Эти отрывочные наблюдения указывали на возможность сохранения жизнеспособности тканей и клеток в искусственных условиях и положили начало глубоким научным исследованиям тканевых культур.
Большая заслуга в деле paзработки методов культивирования тканей принадлежит Каррелю Он впервые доказал возможность размножения клеток животных в искусственных условиях и тем самым продемонстрировал их бессмертность и сходство с одноклеточными свободноживущими организмами. Значительных успехов в этом направлении достигла группа исследователей под руководством Эрла. Они первые получили рост большого числа клеток на стекле и в жидкой перемешиваемой суспензии.
Появление антибиотиков и успехи в создании искусственных питательных сред открыли новую эру в развитии методов тканевых культур.
Тканевые культуры давно нашли применение для решения различных вопросов биологии и медицины. Однако лишь успехи в области вирусологии, достигнутые с помощью тканевых культур, явились мощным стимулом их развития до современного уровня.
Культивирование вирусов помогает решить ряд теоретически проблем, связанных с изучением особенностей взаимодействия вирус-клетка. Кроме того решение целого ряда прикладных задач, связанных с диагностикой и производством препаратов для профилактики вирусных инфекций невозможно без накопления вируссодержащего сырья. 1.
Термином первичная обозначают клеточную культуру, полученную непосредс... При этом не был обнаружен возрастной предел, выше которого ткани утрач... л-тирозина - 18,1 12. л-валина - 11,7 13. рибофлавина - 0,04 23.
Получение клеточных культур . 3.1.
Известны такие первичные культуры, как культура фибробластов куриного ... . Первичной - называется культура, полученная из ткани и выращиваемая in... Фрагменты ткани эксплантаты переносятся на новые чашки, мигрирующие кл... Ткань измельчается до кусочков объемом до 1 - 3 мм, кусочки ткани отмы...
Как уже отмечалось выше, одним из методов получения перевиваемых клето... Часть клеток округляется и отпадает от стекла. Через 7 - 10 смен среды в матрасах, как правило, начинают появляться н... Колонии появляются не только на дне матраса, но также на боковых повер... 3.3.
До недавнего времени тканевые культуры применялись в вирусологии преим... Многолетний опыт показывает, что при использовании однослойных стацион... А. . В дальнейшем, когда клетки прикреплялись к стеклу, культивирование про...
Суспензионное культивирование клеток. В первой стадии, как правило, количество клеток уменьшается, во второй... Потребление клетками глюкозы и выработка молочной кислоты идут паралле... Однородность суспензии, возможность длительного поддержания клеток в л... Необходимо проводить подбор питательных сред для культивирования клето...
Выращивание вирусов в культурах клеток. . После этого солевые растворы заменяются свежей средой. Детали морфологических изменений оказываются различными в случае разны... Среду удаляют с клеточного монослоя и монослой промывают сбалансирован...
Вирусы оказывают цитопатогенное действие и служат этиологическими аген... Указанные ниже меры предосторожности носят самый общий характер и прим... 2 Никакие живые вирусы не должны выноситься из этих помещений, не буду... 5 Вся пластиковая посуда должна быть помещена в специальный бак для ав... 6 Оборудование для хранения и обработки вирусного материала должно раз...
Обнаружить присутствие вирусов и определить их количество можно с помо... 2 Образование зараженными клетками нуклеиновых кислот, которые могут о... Этот метод более чувствителен и позволяет избежать конъюгации каждого ... 4 Наличие антигенов на вирусных частицах может приводить к реакциям ге... Окончательный осадок эритроцитов суспендируют в 200-кратном объеме 0,8...
В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК HeLa. 2. 4. Клеточную суспензию инкубируют в течение 8 ч, после чего осаждают клет... Клетки ресуспендируют в PBS 5-107клмл и проводят три цикла замораживан...
Список литературы 1. Адамс Р. Методы культуры клеток для биохимиков М. Мир, 1983, 263 с. 2. Вирусология.
Методы. Под ред. Б. Мейхи М. Мир, 1988, 344 с. 3. Голубев Д. Б Соминина А. А Медведева М. Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии Л. Медицина, 1976, 224 с. 4. Дьяконов Л. П Глухов В. Ф Поздняков А. А Денисенко Г. Ф Калмыкова Т. П. Культивирование клеток и тканей животных Ставрополь Ставроп.
Правда, 1988, 2 часть, 91 с. 5. Животная клетка в культуре под. ред. Л. П. Дьяконова, В. И. Ситькова. М. 2000 6. Культура животных клеток. Методы. Под ред. Р. Фрешни М. Мир, 1989, 333 с. 7. Руководство по ветеринарной вирусологии. Под ред. В. Н. Сюрина М. Колос, 1965, 687 с. 8. Сергеев В. А. Репродукция и выращивание вирусов животных М. Колос, 1976, 303 с. 9. Феннер Ф Мак-Ослен Б Мимс С Сэмбрук Дж Уайт Д. Биология вирусов животных М. Мир, 1977, т. 1, 447 с.