Метод основан на принципе окраски кислотоустойчивых бактерий. Отличие заключается в предварительной обработке микроорганизмов 0,5 % раствором соляной кислотой, что облегчает окраску спор карболовым фуксином. Споры кислотоустойчивы, поэтому красятся в красный цвет.
Методика окраски по Ожешко:
1. На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислотой и подогреть на пламени в течение 2-3 мин.
2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену. Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы - синий.
Окраска по Романовского-Гимза.
Методика окраски по Романовскому-Гимза:
Краска Романовского-Гимза состоит из метиленового синего, эозина и азура.
1. На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10-20 мин.
2. Препарат промывают водой и высушивают на воздухе.
Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии - в фиолетовый цвет, лептоспиры - в розовый цвет. Сапрофитные (непатогенные) формы окрашиваются в синий цвет. Морфологию спирохет изучают также в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Хорошим методом выявления спирохет является серебрение по Морозову.
К работе № 3 Теоретическая справка
Исследование микроорганизмов в живом состоянии для изучения форм и подвижности.
Техника приготовления препаратов «висячая» и «раздавленная» капли
1 этап. Обезжирить стекло, протерев рабочую поверхность стекла мылом, которое затем удаляют салфеткой.
2 этап.
| Препарат «раздавленная» капля | Препарат «висячая» капля |
| Если микроорганизмы выращены на плотной питательной среде, то на обезжиренное стекло наносят каплю физиологического раствора и в нее вносят петлей небольшое количество мате-риала для исследования. Затем на каплю накла-дывают покровное стекло таким образом, чтобы между ним и предметным стеклом не было пузырьков воздуха. Если культура выращена на жидкой питатель-ной среде, то для приготовления препарата используют пастеровскую пипетку, с помощью которой каплю культуры наносят на предметное стекло. | Препарат готовят аналогичным образом, но каплю культуры наносят на покровное стекло, которое затем накладывают на предметное стекло с лункой, края которой смазаны вазели-ном. Стекла склеиваются и получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает. |