Зональный электрофорез

Наличие стабилизирующей среды – пористого носителя или непрерывного потока БР.

Разделение проводится на поверхности либо внутри поддерживающей среды, насыщенной БР (раствор движется по капиллярам пористой подложки-носителя, который не проводит электрический ток).

1 – электроды

2 – буферный раствор в кювете

3 – слой носителя на пластинке

4 – мостики из фильтровальной бумаги

5 – охлаждаемая металлическая пластина

Электроды не должны касаться носителя (С=const, pH=const).

Низковольтный электрофорез – 4-5 В/см, время разделения 20 часов, источники – 600 В.

Высоковольтный – до 200В/см, источники до 10000 В.

Оценка результатов:

1. окрашивание фореграмм с фотографированием в видимой и УФ областях (качественный анализ)

2. количественный с помощью денситометра

Функции носителя:

1. антиконвекционная среда для поддержания чётких границ зон, различной плотности БР и растворов белков

Виды носителей:

1. бумага, плёнка, мембрана

2. гель

3. порошок

Бумага, целлюлоза, агароза инертны, слабо влияют на разделение.

Крахмал, ПААГ сильно влияют на разделение, пористая структура, размеры пор соизмеримы с размерами молекул, возможно разделение веществ с разной молекулярной массой и одинаковым зарядом.

Ацетат-целлюлозные плёнки.

Достоинства:

1. однородная структура

2. малая адсорбционная способность

3. прозрачность

4. возможность разделения малых концентраций

5. высокая разрешающая способность

6. хорошая растворимость в спец. растворителях

7. разделение зон за 1,5-2 часа

Недостатки:

1. малая толщина и хрупкость