ЛВ (официально ЛП и наркотические средства)
1) Кислотного характера (производные барбитуровой кислоты, салициловой кислоты, некоторые снотворные).
2) Вещества нейтрального или слабокислого характера (производные п-аминофенола, СГ).
3) Вещества слабоосновного и основного характера (алкалоиды, синтетические производные ПАБК, новокаин).
Стадии изолирования:
1. Настаивание биоматериала с полярными растворителями.
Факторы, влияющие на эффективность:
а) Характер биоматериала (паренхимный орган, кости). Свежесть биоматерила. Для высокой степени и. применяют измельчение: ручное (ножницы), мельницы, гомогенизаторы, лиофильная сушка или замораживание.
б) Способ настаивания. Температура, перемешивание (режим), повышенное осмотическое давление (высаливание), применение приборов.
в) Физико-химические свойства растворителя. Общие методы – этанол 96° или вода. Разрабатываются новые методы (ацетон, ацетонитрил). Растворитель должен проникать в биоматериал, растворять ТВ и комплексы ТВ с белками (либо осаждать белки).
г) Физико-химические свойства ТВ. Гидро-/липофильность, способность образовывать комплексы с белками, прочность комплексов. Степень растворимости ТВ в растворителе.
д) рН растворителя. Создается рН=2-3, т.к. ТВ с биоматериале образует комплекс с белками за счет ионных и водородных связей, карбоксильных и аминогрупп белковых молекул. При значении рН=2-3 белок становится электронейтральным (ЧЭТ белка), связи разрушаются, ТВ высвобождается, белок остается в биоматериале или выпадает в осадок.
2. Очистка извлечения.
Очищают от пептидов, полипептидов, жиров, пигментов и т.д.
Эти вещества мешают дальнейшему исследованию.
а) Механические методы: фильтрование, процеживание, центрифугирование.
б) Физико-химические методы. Осаждение белковым молекул при температуре (40-50°С), осаждение 96° этанолом, действие высаливающих агентов (дегидратация белка понижает его растворимость), диализ, электродиализ, экстракция, реэкстракция.
3. Жидкость-жидкость экстракция. Различные неполярные (органические) растворители в зависимости от природы ТВ: хлороформ, диэтиловый эфир.
Факторы, влияющие на эффективность жидкость-жидкость экстракции:
а) Природа ТВ и растворителя. Подобное растворяется в подобном. Степень экстракции R рассчитывается по формуле:
, , где
Ро – константа распределения ТВ между органической и водной фазами.
Vв – объем водной фазы
Vo – объем органической фазы.
б) Значение рН водной фазы. Органические растворители хорошо экстрагируют недиссоциированные молекулы, поэтому при кислых значениях рН водной фазы в органический растворитель будут переходить вещества кислотного характера, а при щелочном значении рН – основного.
Оптимальные значения рН
Для веществ основного характера: рН = рКа + 2
Для веществ кислого характера: рН = рКа – 2
в) Температура. При изменении температуры может меняться растворимость в воде и органическом растворителе.
г) Наличие в водной фазе электролитов. Они повышают осмотическое давление, экстрагируемое вещество хуже растворяется.
д) Объем водной и органической фаз. Отношение объемов водной и органической фаз называется кратностью экстракции.