Цей метод диференціації мікробних клітин заснований на відмінності в хімічному складі клітинних оболонок. Суть метода полягає в тому, що в клітинах одних видів мікроорганізмів в результаті забарвлення утворюється нерозчинна в спирті сполука йоду з основним барвником. В той же час в клітинах інших видів мікроорганізмів ця сполука з'являється тимчасово і після обробки спиртом розчиняється. Мікроорганізми першої групи називають грампозитивними, другої – грамнегативними.
► ХІД РОБОТИ: ◄
1) На одномупредметному скельці по черзі готують мазки двох культур.
2) Мазок висушують на повітрі, фіксують над полум'ям пальника і забарвлюють протягом 2 хв розчином кристалічного фіолетового.
3) Потім барвник зливають і на препарат наносять на 1 хв розчин Люголя.
4) Р-н Люголя зливають, препарат обробляють спиртом протягом 15 – 20 с.
5) Препарат промивають водою та забарвлюють фуксином Пфейфера протягом 1 хв.
6) Барвник змивають водою, препарат висушують і мікроскопують з масляною імерсією.
7) Визначають, яка із запропонованих культур є грампозитивною, а яка грамнегативною: після цієї обробки грампозитивні мікроорганізми набувають темно-фіолетового кольору, а грамнегативні забарвлюються лише в колір додаткового забарвлення (фуксину).
8) Досліджувані мікроорганізми схематично зарисовують.
2. Забарвлення спор у бактерій
Спори бактерій в порівнянні з вегетативними клітинами мають високу стійкість до несприятливих умов зовнішньго середовища. Це округлі, овальні або еліпсовидні утворення. Якщо діаметр спори не перевищує діаметру клітин, в якій спора утворюється, клітину називають бацилярною, якщо перевищує, то залежно від розташування спори в центрі або на кінці клітини, цю клітину називають відповідно клостридіальною або плектридіальною. В бацилярній клітині спора може розміщуватися в центрі – центральне положення, на кінці – термінальне і ближче до одного з кінців — субтермінальне положення.
► ХІД РОБОТИ: ◄
1) На фіксований в полум'ї препарат спороутворюючих бактерій наливають метиленовий синій Леффлера, доводять його до кипіння і кип'ятять 15 – 20 хв, тримаючи скло над полум'ям.
2) Мазок промивають водою і дофарбовують протягом 30 с 0,5%-ним| водним розчином нейтрального червоного.
3) Ще раз промивають, підсушують і далі досліджують препарат з масляною імерсією об'єктиву. Спори забарвлюються в блакитний або синій колір, цитоплазма — в рожевий.
4) Результати спостережень зарисовують.