В фотоколориметрах со сменными светофильтрами световые потоки, проходящие через кюветы с растворами, имеют широкую полосу спектра 30...50 нм, поэтому такой световой поток не является монохроматическим, что в некотором роде снижает воспроизводимость и правильность анализа. Более точные данные получают на спектрофотометрах и фотоколориметрах с дифракционной решеткой, в которых световой поток, проходящий через кювету, монохроматичен, т. е. имеет одну длину волны. Измерение оптической плотности растворов веществ на спекрофотометрах проводят при длине волны максимума поглощения. Это позволяет анализировать в одном растворе разные вещества, максимумы поглощения которых расположены при разных длинах волн.
Способность поглощать ЭМИ определенных длин волн зависит от электронного строения молекулы. В спектрах соединений, содержащих одни и те же структурные фрагменты, наблюдаются характерные полосы поглощения.
Во всех случаях избирательное поглощение света в определенной области спектра, как правило, связано с наличием определенных группировок. Такие группировки называются хромофорами.
Длина волны максимума поглощения соединения служит для идентификации содержащегося в нем хромофора.
Поглощение энергии излучения в УФ- и видимой областях спектра определяется прежде всего числом и расположением электронов в поглощающих молекулах или ионах. Сопряженные двойные связи вызывают поглощение при больших длинах волн. Чем длиннее сопряженная цепь, тем при большей длине волны наблюдается поглощение. При достаточно большой длине цепи поглощение переходит в видимую область, и в результате наблюдается окрашивание соединения. Так, β-каротин, имеющий 11 сопряженных двойных связей, интенсивно поглощает в области 420...480нм и окрашен в желто-зеленый цвет.
Спектры поглощения в УФ- и видимой областях служат полезным источником дополнительных доказательств при установлении структуры органического соединения (табл. 9).
Таблица 9 Характеристические полосы поглощения некоторых хромофоров
| Хромофор | Длина волны, нм | Интенсивность полос поглощения |
| С=С | 175...200 | Сильная |
| С=О | 180...195 | » |
| 270...295 | Слабая | |
| О-Н | Сильная | |
| N=N | 340...370 | Сильная |
| С=К | 210...230 | Сильная |
| 230...250 | Слабая | |
| 190...210 | Сильная |