Методы качественного определения пуриновых алкалоидов

Методы качественного определения пуриновых алкалоидов. Общие способы идентификации 1. Мурексидная проба. Общегрупповая реакция на пурины, основанная на окислительно-гибролитическом разложении веществ группы ксантина до производных пиримидина. Для проведения реакции препарат нагревают на водяной бане с окислителем(H2O2, Br2, HNO3) в кислой сореде. Затем добавляют раствор аммиака – появляется пурпурно-красное окрашивание.

На примере мочевой кислоты: Для мочевой кислоты нагревание производят с концентрированной азотной кислотой. В случае метилированных производных ксантина вместо азотной кислоты применяют раствор перекиси водорода в солянокислой среде. 2. Электрофильное замещение после щелочного гидролиза. При значении pH свыше 9 происходит разложение кофеина до кофеиндикарбоновой кислоты, которая разлагается до кофеидина и соответствующего карбоната. В сернокислой среде кофеин может разлогаться до муравьиной кислоты.

Теофиллидин, полученный в такой же реакции с теофиллином, может быть идентифицирован по образованию азокрасителя. 3. Реакция с реактивом Вагнера. При нагревании в 0,5-1,0 мл воды, прибавляют 1-2 капли раствора йода 0,1 моль/л, 1-2 капли разведенной хлористоводородной кислоты и наблюдают оранжево-красный или кирпично-красный осадок. 4. Реакция с танином. К навеске препарата прибавляют по каплям 0,1% раствор танина и наблюдают беловатый или желтоватый аморфный осадок, растворимый в избытке реактива. 5. Реакция с хлоридом ртути(II). Общая для кофеина, теобромина, теофиллина реакция с хлоридом ртути(II); образуется белый кристаллический осадок, представляющий собой комплексное соединение, включающее оба вещества в эквимолярном соотношении. 6. ТСХ Частные способы идентификации Кофеин: 1. Определяют Тпл. (234° - 239°С), ИК-спектральные характеристики. 2. Реакция с ацетилацетоном и диметиламинобензальдегидом.

Раствор субстанции в смеси ацетилацетона и раствора натрия гидроксида разведенного нагревают на водяной бане, охлаждают и прибавляют раствор диметиламинобензальдегида и еще раз нагревают. Охлаждают и прибавляют воду - появляется интенсивное синее окрашивание: 3. Реакция с раствором калия йодида йодированным в присутствии кислоты хлористоводородной разведенной - появляется коричневый осадок, который растворяется при добавлении раствора натрия гидроксида. 4. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 0,5 % - в отличие от кофеина моногидрата.

Кофеин-бензоат натрия: 1. Остаток бензойной кислоты в кофеин-бензоате натрия определяют по осадку телесного цвета в реакции с хлоридом железа(III). 2. Препарат подкисляют уксусной кислотой, если нужно, фильтруют, прибавляют цинк-уранил-ацетат – образуется желтый кристаллический осадок. 3. Препарат внесенный в пламя, окрашевает его в желтый цвет. Теобромин: 1. Реакция его натриевой соли, полученной при взаимодействии щелочи с избытком теобромина (используется фильтрат) с раствором CоCl2 - появляется быстро исчезающее интенсивное фиолетовое окрашивание и образуется осадок серовато - голубого цвета: 2. Реакция натриевой соли теобромина с раствором AgNО3 – образуется коричневая густая желатинообразная масса (серебрянная соль), которая разжижается при нагревании до 60-80°С и снова застывает при охлаждении.

Теофиллин: 1. Со щелочным раствором нитропруссида натрия - образуется зеленое окрашивание, исчезающее при добавлении избытка кислоты. 2. С 2,6-дихлорхинонхлоримидом в боратном буферном растворе буферном растворе образует мероцианиновый краситель интенсивно-голубого цвета: 3. Реакция с CoCl2(см. теобромин) Эуфиллин: 1. Реагирует с раствором сульфата меди с образованием красно-фиолетового комплекса(реакция на этилендиамин). Дипрофиллин: 1. При кипячении препарата с раствором едкого натра наблюдают выделение аммиак, окрашивающий красную лакмусовую бумажку в синий цвет. 2. Препарат и бисульфат калия помещают в пробирку, накрывают фильтровальной бумагой, смоченной свежеприготовленным раствором нитропруссида натрия и каплей пиперидина и нагревают; появляется синее пятно, переходящее в розовое при добавлении 2-3 капель 1 н. раствора едкого натра.