Объект исследования. Были проведены исследования 3-х пациентов женского пола в возрасте от 21 до 51 года, поступивших в стационар ККБ №1 с заболеванием - эндемический зоб. Исследования проводили на крови, взятой из вены медперсоналом ККБ№1. У каждой пациентки кровь бралась 4 раза: А - до оперпции, Б - в день операции, В - через3-4 дня после операции, Г-через неделю после операции.
Определяли активность церулоплазмина в плазме крови. 2.2. Методика определения активности ЦП Определение церулоплазмина в плазме крови модифицированным методом Ревина []. Принцип метода основан на окислении р-фенилендамина при участии церулоплазмина [Камышников, 2000]. Реактивы: 1. 0.5 %-ный водный раствор солянокислого р-фенилендиамина. 2. 0.4 М ацетатный буфер, рН 5.5. Готовят из двух растворов: 1) 54.44 г ацетата натрия растворяют в 1л дистиллированной воды; 2) 22.6 мл ледяной уксусной кислоты доводят до 1л. Полученные растворы смешивали в отношении 9:1 в большом количестве. 3. 3%-ный раствор фтористого натрия.
После растворения соли в дистиллированной воде раствор профильтровывают.
Ход определения: В пробирки вносят по 8 мл ацетатного буфера и 0.1 мл плазмы.
В контрольную пробирку добавляют 2мл раствора фтористого натрия (для инактивации ферментативной активности церулоплазмина). Затем во все пробирки вносят по 1 мл раствора р-фенилендиамина (используемого в качестве субстрата). Пробирки встряхивают, помещают в термостат и инкубируют в течение часа при температуре 37 ?С. После инкубации во все пробирки (за исключением контрольной) добавляют по 2 мл раствора фтористого натрия. Содержимое пробирок перемешивают, затем их переносят в холодильник, где выдерживают 30 мин при 4?С. Пробы колориметрируют против контроля (бледно-розовой окраски) в кюветах с шириной слоя 1,0 см при ? = 530 нм. Умножая значение оптической плотности на коэффициент пересчета 875, получают величину концентрации церулоплазмина в мг/л. 2.3