Исследование агрегации тромбоцитов

Количественное исследование агрегации тромбоцитов позволяет дифференцировать качественные нарушения тромбоцитов в отдельные группы. Это простой лабораторный тест, в котором конгломерация одиночных тромбоцитов в группы или агрегаты большего размера определяется количественно по степени пропускания света через тромбоцитосодержащую плазму. Тромбоцитарный агрегометр (рис. 5-3) состоит из небольшой прозрачной кюветы, в которую помещают пробу тромбоцитов пациента в стандартной концентрации. Через кювету пропускается свет от калиброванного источника, поступающий на фотоэлемент. Фотоэлемент связан с регистрирующим устройством, измеряющим светопрохождение (или оптическую плотность) с учетом времени. Если тромбоциты представляют собой суспензию одиночных клеток (т. е. до агрегации), то пропускание света минимально. С увеличением агрегации плазма, содержащая тромбоциты, становится все светлее, а пропускание света возрастает. Представить себе это явление можно, сравнивая прозрачность жидких суспензий, содержащих одну и ту же массу глины или в виде большого количества мелких частиц, или сконцентрированную в нескольких кусочках.

Агрегацию тромбоцитов in vitro можно инициировать, вводя различные экзогенные вещества (чаще всего АДФ, адреналин, коллаген, тромбин, арахидоновую кислоту и ристоцетин) в агрегометрическую кювету. АДФ, адреналин и тромбин обладают уникальной способностью вызывать агрегацию тромбоцитов самостоятельно, без обязательной дегрануляции клеток и экзоцитоза. Поэтому в низких концентрациях эти вещества будут стимулировать только обратимую первичную волну агрегации. При более

высоких концентрациях АДФ, адреналина и тромбина тромбоциты полностью активируются и выделение гранулярного содержимого наряду с синтезом тромбоксана А₂ приводит к несколько отсроченной, но усиленной вторичной волне агрегации тромбоцитов. При еще больших концентрациях первичная волна агрегации погружается во вторичную волну и можно видеть только одну полную волну агрегации.

Хотя коллаген связывается с гликопротеином 1а тромбоцитарной мембраны, он не вызывает немедленной агрегации тромбоцитов. Однако спустя некоторое время коллаген индуцирует полную агрегацию в результате внутренней активации тромбоцитов. Способность арахидоновой кислоты стимулировать агрегацию зависит от функционирования фермента циклооксигеназы в ходе синтеза про-стагландинов.

Синтез тромбоксана А; из арахидоновой кислоты приводит к полной активации тромбоцитов, экзоцитозу и агрегации.

Уникальность ристоцетина состоит в том, что агрегация под его воздействием не опосредуется изменением метаболизма тромбоцитов. Аналогичная по механизму агрегация наблюдается при фиксации тромбоцитов в формалине. Полагают, что ристоцетин обеспечивает агрегацию путем ассоциации с ГП 1Ь тромбоцитарной мембраны, активируя эту молекулу для связывания фактора Виллебранда. Поэтому в присутствии ристоцетина ФВ соединяет тромбоциты в большие агрегаты. Если тромбоциты жизнеспособны, индуцированная ристоцетином агрегация приводит к активации клеток и выделению эндогенных гранул. В отсутствии фактора Виллебранда активации не происходит.

Рис. 5-4. Пример агрегации тромбоцитов здорового человека при использовании агрегометра, представленного на рис. 5-3. Реакции на введение АДФ, адреналина, коллагена и ристоцетина в определенных концентрациях (момент добавления указан стрелкой).

Методы исследования вторичного гемостаза.