Эффективность расщепления коротких последовательностей ДНК некоторыми распространенными рестриктазами

Рестриктаза Последовательность олигонуклеотидов в окрестностях сайта рестрикции Длина цепи, нт Процент расщепления олигонуклеотида после инкубации в течение
2 ч 20 ч
BamHI CGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCCGC >90 >90 >90 >90
BglII CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC >90 >90
ClaI CATCGATT GATCGATC CCATCGATGG CCCATCGATGGG >90 >90
EcoRI GGAATTCC CGGAATTCCG CCGGAATTCCGG >90 >90 >90 >90 >90 >90
HindIII CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG
NheI GGCTAGCC CGGCTAGCCG CTAGCTAGCTAG
PstI GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA

Таблица II.1 (окончание)

 

Рестриктаза Последовательность олигонуклеотидов в окрестностях сайта рестрикции Длина цепи, нт Процент расщепления олигонуклеотида после инкубации в течение
2 ч 20 ч
PvuI CCGATCGG ATCGATCGAT TCGCGATCGCGA
SacI CGAGCTCG
SacII GCCGCGGC TCCCCGCGGGGA >90
SmaI CCCGGG CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA >90
SpeI GACTAGTC GGACTAGTCC CGGACTAGTCCG CTAGACTAGTCTAG >90 >90
SphI GGCATGCC CATGCATGCATG ACATGCATGCATGT
XbaI CTCTAGAG GCTCTAGAGC TGCTCTAGAGCA CTAGTCTAGACTAG >90 >90 >90 >90
XhoI CCTCGAGG CCCTCGAGGG CCGCTCGAGCGG
Примечание. Курсивом выделены последовательности сайтов рестрикции.

 


ДНК-метилазы. Большинство штаммов E. coli содержит два типа ферментов, метилирующих ДНК: dam- и dcm-метилазы. Первая осуществляет перенос метильных групп в N-положение аденина в последовательности GATC. В таком случае многие рестриктазы (например BclI, MboI или ClaI), в состав сайтов рестрикции которых входит данная метилированная последовательность, перестают расщеплять ДНК по этим сайтам. Аналогичное действие на некоторые рестриктазы, например EcoRII, оказывает и dcm-метилаза, осуществляющая метилирование остатков цитозина по положению С5 в последовательностях CMeCAGG и CMeCTGG. Для того чтобы избежать нежелательного влияния этих метилаз на клонируемые ДНК, в качестве хозяев используют мутантные штаммы E. coli: dam- и dcm-. ДНК-метилазы бактериальных систем рестрикции и модификации применяют для блокирования in vitro соответствующих сайтов рестрикции на исследуемых фрагментах ДНК с целью получения под действием гомологичных рестриктаз фрагментов больших размеров.