Рестриктаза | Последовательность олигонуклеотидов в окрестностях сайта рестрикции | Длина цепи, нт | Процент расщепления олигонуклеотида после инкубации в течение | |
2 ч | 20 ч | |||
BamHI | CGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCCGC | >90 >90 | >90 >90 | |
BglII | CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC | >90 >90 | ||
ClaI | CATCGATT GATCGATC CCATCGATGG CCCATCGATGGG | >90 | >90 | |
EcoRI | GGAATTCC CGGAATTCCG CCGGAATTCCGG | >90 >90 >90 | >90 >90 >90 | |
HindIII | CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG | |||
NheI | GGCTAGCC CGGCTAGCCG CTAGCTAGCTAG | |||
PstI | GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA |
Таблица II.1 (окончание)
Рестриктаза | Последовательность олигонуклеотидов в окрестностях сайта рестрикции | Длина цепи, нт | Процент расщепления олигонуклеотида после инкубации в течение | |
2 ч | 20 ч | |||
PvuI | CCGATCGG ATCGATCGAT TCGCGATCGCGA | |||
SacI | CGAGCTCG | |||
SacII | GCCGCGGC TCCCCGCGGGGA | >90 | ||
SmaI | CCCGGG CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA | >90 | ||
SpeI | GACTAGTC GGACTAGTCC CGGACTAGTCCG CTAGACTAGTCTAG | >90 >90 | ||
SphI | GGCATGCC CATGCATGCATG ACATGCATGCATGT | |||
XbaI | CTCTAGAG GCTCTAGAGC TGCTCTAGAGCA CTAGTCTAGACTAG | >90 | >90 >90 >90 | |
XhoI | CCTCGAGG CCCTCGAGGG CCGCTCGAGCGG | |||
Примечание. Курсивом выделены последовательности сайтов рестрикции. |
ДНК-метилазы. Большинство штаммов E. coli содержит два типа ферментов, метилирующих ДНК: dam- и dcm-метилазы. Первая осуществляет перенос метильных групп в N-положение аденина в последовательности GATC. В таком случае многие рестриктазы (например BclI, MboI или ClaI), в состав сайтов рестрикции которых входит данная метилированная последовательность, перестают расщеплять ДНК по этим сайтам. Аналогичное действие на некоторые рестриктазы, например EcoRII, оказывает и dcm-метилаза, осуществляющая метилирование остатков цитозина по положению С5 в последовательностях CMeCAGG и CMeCTGG. Для того чтобы избежать нежелательного влияния этих метилаз на клонируемые ДНК, в качестве хозяев используют мутантные штаммы E. coli: dam- и dcm-. ДНК-метилазы бактериальных систем рестрикции и модификации применяют для блокирования in vitro соответствующих сайтов рестрикции на исследуемых фрагментах ДНК с целью получения под действием гомологичных рестриктаз фрагментов больших размеров.