Миелопероксидаза окисляет ряд субстратов (бензидин, ортофенилепдиамин) в присутствии перекиси водорода, что сопровождается цветной реакцией. Миелопероксидаза - фермент, содержащийся в гранулах фагоцитов, катализирующий образование микробицидных гипогалидов из галидов. Определение активности миелопероксидазы позволяет, таким образом, судить о бактерицидной активности фагоцитов.
Для проведения цитохимического исследования клеток готовят мазки крови на стекле, фиксируют 4% формалиново-спиртовым раствором (10 частей 40% формалина и 90 частей 96% спирта) в течение 30 сек. После промывания водой на высушенный препарат наносят реактив на пероксидазу с бензидином на 5 мин. Тщательно промывают в проточной воде и высушивают. Докрашивают мазки различными красителями: Романовского-Гимзы, 0,5% раствором метилового зеленого или 0,1% водным раствором метиленового синего. При микроскопии пользуются полуколичественной оценкой результатов с определением среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Для этого при микроскопии подсчитывают 100 клеток, дифференцируя их на группы: с отрицательной реакцией (-), слабоположительной (+), положительной (++) и резкоположительной (+++). Затем число клеток с одинаковой интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов, сумма этих величин, деленная на сто, представляет собой СЦК для одной клетки. СЦК нейтрофилов при окраски на миелопероксидазу у здоровых людей равен 2,56±0,033.
Кроме цитохимических исследований, активность миелопероксидазы можно определять фотометрическим методом. Для этого из венозной крови, стабилизированной гепарином, выделяют лейко-взвесь, определяют количество нейтрофилов в 1 мл и готовят клеточную суспензию концентрацией 500 тыс/мл на дистиллированной воде. Взвесь выдерживают до 20 минут до полного лизиса клеток. Готовят 4 разведения лизата на дистиллированной воде (1:1, 1:2, 1:4, 1:8) и по 25 мкл вносят в плоскодонные планшеты по 2 образца на разведение. К клеточному лизату добавляют 100 мкл субстратной смеси из ОФД (0,4 мг/мл) и 0,002%-ной перекиси водорода на фосфатно-цитратном буфере рН 5,0. Через 5 минут реакцию останавливают 100 мкл 1н серной кислоты. Измеряют ОП на фотометре при 492 нм, предварительно выставив бланк прибора по воздуху. Для перевода единиц ОП в у.е. активности пероксидазы строят калибровочную прямую. Для этого из коммерческого препарата пероксидазы хрена (удельная активность 350-500 ЕД/мг) готовят разведение на дистиллированной воде от 2 мкг/мл до 0,015 мкг/мл. Далее проводят реакцию, как описано выше. Калибровочную прямую строят, откладывая на оси ординат оптическую плотность на оси абсцисс дозы пероксидазы. Для стандартизации полученных результатов величину оптической плотности пересчитывают на 100 тыс. клеток.
Увеличение уровня миелопероксидазы наблюдается при острых и хронических бактериальных инфекциях, снижение при хроническом гранулематозе, СПИДе и др.