рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры
- Раздел Медицина
- /
- Методы оценки иммунного статуса Учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов
Реферат Курсовая Конспект
Методы оценки иммунного статуса Учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов
Методы оценки иммунного статуса Учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов - раздел Медицина, Государственное Образовательное Учреждение Высшего Проф...
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования
«Курский государственный медицинский университет
Федерального агентства по здравоохранению
и социальному развитию»
Кафедра клинической иммунологии и аллергологии
С.М. Юдина, О.Н. Поповцева
Методы оценки иммунного статуса
Учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов
Курск - 2006
| УДК 612.017.1 (072) | Печатается по решению |
| ББК 28.707.4 я 7 | редакционно-издательского |
| Ю 16 | совета ГОУ ВПО КГМУ |
| Росздрава |
Рекомендовано Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для студентов медицинских институтов и университетов (УМО – 242 от 09.05.06).
Юдина С.М., Поповцева О.Н.Методы оценки иммунного статуса. Учебное пособие для студентов и врачей. – Курск: КГМУ, 2006. – 120 с.
Рецензенты:
Л.В. Ганковская – д.м.н., профессор кафедры иммунологии Российско-го государственного медицинского университета
И.А. Снимщикова – д.м.н., профессор, зав. кафедрой иммунологии медицинского института Орловского государствен -ного университета
В пособии представлены современные лабораторные методы оценки иммунного статуса при различных видах иммунопатологии. Дана характеристика клеток, участвующих в развитии иммунных реакций, белков плазмы крови, иммуноглобулинов, системы комплемента, цитокинов. Описаны принципы исследования гуморальных и клеточных иммунных реакций, техника постановки наиболее распространенных лабораторных исследований.
Учебное пособие предназначено для студентов медицинских вузов, клинических ординаторов и интернов, слушателей ФПО.
| ISBN 5-7487-1114-1 | ББК 28.707.4 я 7 |
| Ю 16 | |
| ã Юдина С.М., Поповцева О.Н., 2006 ã ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2006 |
Оглавление
| Введение……………………………………………………………………. | |
| 1. Иммунный статус и методы его оценки ………………………………. | |
| · Лимфоциты………………………………..……………..……….… | |
| · Клетки МФС………………………………………………….….….. | |
| · Медиаторные клетки……………………………………….……..... | |
| 2. Методы иммунофенотипирования лимфоцитов………….…………... | |
| · Выделение фракций мононуклеаров………………….………..…. | |
| · Проточная цитофлуорометрия……………………….…………..... | |
| · Метод непрямой иммунофлуоресценции …………………….… | |
| · Иммуноцитохимический метод………………………..……..……. | |
| 3. Методы исследования функциональной активности лимфоцитов...... | |
| · Реакция бласттрансформации лимфоцитов……………………….. | |
| · Смешанная культура лимфоцитов………………………….…..…. | |
| · Методы оценки апоптоза…………………………………….…...... | |
| 4. Методы исследования гуморальных иммунных реакций….….…….. | |
| · Белки плазмы крови……………………………………..….……… | |
| · Методы электрофореза белков……………………….…...……….. | |
| · Иммуноглобулины.…………………………………….………….. | |
| · Методы определения содержания иммуноглобулинов…….….… | |
| · Парапротеины……………………………………………………….. | |
| · Криоглобулины…………………………………………………...… | |
| · Методы определения иммунных комплексов…………………….. | |
| · Определение аутоантител при диагностике системных заболеваний соединительной ткани……………………………………...….. | |
| 5. Система цитокинов……………………….……………………………... | |
| · Методы определения цитокинов………….…………………..…… | |
| 6. Система комплемента…………………………………………………... | |
| · Методы определения активности комплемента…….…………….. | |
| · Определение компонентов комплемента……………..…………… | |
| 7. Методы исследования фагоцитарной активности гранулоцитов……………………………………………………………. | |
| · НСТ-тест……………………………….…..…………………….. | |
| · Определение миелопероксидазы……….……….……………… | |
| · Хемилюминесценция…………………….……………………... | |
| 8. Методы аллергодиагностики…………………………………………… | |
| · Классификация и механизмы аллергических реакций……….. | |
| · Определение содержания IgE ………………………………..... | |
| · Тест дегрануляции базофилов ……………….………………… | |
| · Тест клеточной антигенной стимуляции базофилов – CAST……………………………………………………………….. | |
| · Реакция торможения миграции лейкоцитов……………………... | |
| Задания для самоподготовки……………………………………………… | |
| Приложение………………………………………………………………… | |
| Словарь терминов…..……………………………………………………… | |
| Список литературы……..…………………………………………………. | |
| Список сокращений и условных обозначений..…………………………. |
Введение
Прогрессирующий рост иммунопатологии и аллергических болезней, отмечающийся в последние годы, обосновывает необходимость знания механизмов их развития, диагностики и профилактики. Наибольшее распространение среди них приобрели вторичные иммунодефициты, формирование которых во многом обусловлено воздействием неблагоприятных факторов внешней среды на иммунную систему. Кроме этого, многие виды терапевтической, хирургической, акушерско-гинекологической и другой патологии сопровождаются существенными нарушениями функционирования иммунной системы, что существенно влияет на течение и исходы заболевания. Поэтому выявление нарушений в системе иммунитета имеет не только диагностическое и прогностическое значение, но необходимо и для проведения адекватной иммунокоррекции.
В учебном пособии подробно представлены характеристика клеток иммунной системы, методы идентификации, определения их количества и функциональной активности. Наряду с этим, описаны методы исследования гуморальных иммунных реакций, свойства различных белков плазмы крови и способы их определения. С учетом последних данных о роли системы цитокинов в патогенезе различных заболеваний описаны их свойства, влияние на развитие иммунного ответа и формирование воспалительного процесса различного генеза. Подробно рассмотрены методы определения цитокинов в различных биологических жидкостях. В пособии также приводятся характеристика фагоцитирующих клеток, особенности клеточного метаболизма при их активации и методы оценки функциональной активности фагоцитов.
Особое внимание уделено механизмам развития аллергических реакций и методам специфической и неспецифической аллергодиагностики.
С целью контроля самоподготовки включены контрольные вопросы и ситуационные задачи по оценке иммунного статуса. В приложении приведены нормальные значения различных иммунологических показателей.
Учебное пособие предназначено для студентов медицинских вузов, аспирантов, клинических ординаторов, слушателей ФПО и других специалистов, проявляющих интерес к иммунологии и аллергологии.
Иммунный статус и методы его оценки
Оценка ИС представляет собой процесс получения комплекса количественных и функциональных показателей, отражающих состояние различных звеньев системы… В качестве скрининговых лабораторных исследований большое распространение… 1. Общее количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулуОбъекты и методы иммунологических исследований
Доаналитический этап исследования иммунного статуса включает подготовку больного и получение биологического материала, консервацию, хранение и… Для иммунологического исследования кровь необходимо брать натощак с 8 до 10… Забор крови для серологических исследований производят из локтевой вены в чистую сухую стеклянную пробирку или в…Лимфоциты
Лимфоциты – округлые клетки диаметром 5 – 15 мкм. В норме в периферической крови содержание их составляет 18-40% или (1,2 – 3) х 109 /л. При окраске… Основным маркером Т-лимфоцитов является молекула CD3, которая входит в состав… Т-лимфоциты подразделяются на субпопуляции: Т-хелперы (Тh0, Th1, Th2) и цитотоксические лимфоциты (ЦТЛ). Субпопуляции…Клетки МФС
Тканевые макрофаги — производные моноцитов: 1. Плевральные и перитонеальные макрофаги. 2. Звездчатые ретикулоэндотелиоциты (купферовскиеклетки) печени.Антимикробная кислородзависимая система
Антимикробная кислородзависимая система относится к системам, которые потенциально, особенно при большом количестве микробов, могут выйти из-под… Действие кислороднезависимых механизмов происходит в условиях кислой среды… Эффекторные функции макрофагов не ограничиваются фагоцитозом и секрецией биологически активных веществ, а включают еще…Медиаторные клетки
Нейтрофильные гранулоциты (нейтрофилы) составляют наибольшую часть популяции полиморфноядерных лейкоцитов. Основные функции нейтрофилов -… Эозинофильные гранулоциты (эозинофилы) помогают организму избавиться от… Кроме того, на поверхности эозинофилов имеются рецепторы к Fc-фрагменту иммуноглобулинов классов G и Е, а также к…Методы иммунофенотипирования лимфоцитов
При изучении лимфоцитов оценивают их количество в периферической крови и функциональную активность. Определение количества клеток проводят с учетом… Объем проводимых исследований при ИФТ лимфоцитов определяется его задачами.… Для определения фенотипического профиля лимфопролиферативных заболеваний необходимо проводить обследование в…Выделение фракции мононуклеаров
Для выделения лимфоцитов можно использовать как цельную кровь, так и лейковзвесь, полученную при инкубации крови в течение 30 мин при 37оС для…Проточная цитофлуорометрия
Метод непрямой иммунофлуоресценции
Для проведения исследования 25 мкл суспензии мононуклеаров (3х106/мл) вносят в коническую микропробирку, добавляют 10 мкл раствора инактивированной…Иммуноцитохимический метод
Первым этапом исследования является нанесение выделенных из крови клеток на предметные стекла с лунками. Для этого в каждую лунку наносят по 20 мкл… Учет результатов проводят при световой микроскопии с использованием масляной…Методы исследования функциональной активности лимфоцитов
Способность лимфоцитов распознавать антиген оценивают при совместном культивировании лимфоцитов двух генетически различающихся индивидумов в… Для оценки потенциальной способности к активации Т-лимфоцитов используется… Пролиферативная активность лимфоцитов определяется в реакции бласттрансформации лимфоцитов.Реакция бласттрансформации лимфоцитов
Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивают по интенсивности синтеза ДНК в ответ на стимуляцию митогеном (ФГА, КонА) или распространенные… Для постановки реакции в асептических условиях из вены берется 5-10 мл крови в… Приготовленную лейкоцитарную взвесь разливают в стерильные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно…Смешанная культура лимфоцитов
Реактивность в смешанной культуре лимфоцитов является од-ним из критериев в оценке клеточного иммунитета. СКЛ позволяет провести типирование HLA,… Для постановки реакции используют взвесь лимфоцитов, выделенных из крови… В лунки стерильного круглодонного иммунологического планшета внесят по 0,1 мл клеточной суспензии в растворе Хенкса и…Методы оценки апоптоза
Апоптоз играет важную роль в физиологических процессах: органогенезе, эмбриональном развитии, регуляции состава и численности клеточных популяций в… Процесс апоптоза может быть разделен на две фазы: · формирование и проведение апоптотических сигналов – фаза принятия решения;Методы исследования гуморальных иммунных реакций
Методы исследования гуморального иммунитета включают определение белкового состава сыворотки крови при электрофорезе, уровня иммуноглобулинов (Ig) классов M, G, A и Е, их подклассов, специфических антител к определенным антигенам, а также содержание патогенных иммунных комплексов.
Белки плазмы крови
Альбумины – это протеины, которые составляют около половины всех белков плазмы. При электрофорезе они являются наиболее подвижной фракцией. Синтез…Глобулины.
α1–кислый протеин -концентрация в сыворотке составляет у мужчин 0,5 - 1,3 г/л, у женщин 0,4 - 1,2 г/л, период полужизни - 5,5 дня. Увеличение…Глобулины
Церулоплазмин является одним из быстрых медьсодержащих α2-глобулинов (является депо ионов меди) и обладает свойствами фермента ферроксидазы.… α2-Макроглобулин - гликопротеид, ингибитор протеиназ, это крупный белок… β-глобулины –количественные изменения белков этой фракции встречаются реже и при более ограниченном числе…Методы электрофореза белков
1. Зональный электрофорез - полуколичественный метод, позволяющий разделить смесь белков в зависимости от их молекулярной массы и электрического… АльбуминИммуноглобулины
Вторичная структура полипептидных цепей Ig представлена доменами – участками, связанными дисульфидными связями. Каждая L-цепь состоит из двух… Рис. 4. Структура иммуноглобулина класса G.Основные физико-химические и биологические свойства
Иммуноглобулинов человека
Методы определения иммуноглобулинов
Определение иммуноглобулинов в реакции радиальной иммунодиффузии (РРИД) по Манчини.Метод основан на феномене преципитации, когда взаимодействие… Для постановки реакции на поверхности стеклянной пластины готовят слой 3%… В некоторых случаях при учете результатов отмечается образование двойных колец преципитации, что связано с…Парапротеины
Парапротеины (обычно IgG или IgM) встречаются наиболее часто при множественной миеломе, при таких системных заболеваниях иммунной системы, как…Криоглобулины
Методы определения иммунных комплексов
Наибольшим патологическим потенциалом обладают растворимые ИК средних размеров, сформированные при некотором избытке антигена, способные… 1) антигеннеспецифические методы, предназначенные для обнаружения ИК вне… 2) антигенспецифические методы, позволяющие идентифицировать антиген в составе ИК (иммунофлюоресцентный анализ).Определение аутоантител при диагностике системных заболеваний соединительной ткани
Все аутоиммунные процессы можно разделить на гомеостатические (физиологические) и патологические. Первая группа не имеет патогенетического значения… Однако в ряде случаев аутоиммунные процессы начинают приобретать… К аутоиммунным болезням относятся заболевания, основным механизмом развития которых является взаимодействие антител…Основные серологические маркеры аутоиммунных заболеваний
Определение ANA в реакции непрямой иммунофлуоресценции
Таблица 5Оценка результатов определения ANA в реакции
Непрямой иммунофлуоресценции
Определение ANA и ENA методом твердофазного ИФА
Отличительной особенностью систем ИФА ENA- скрининг и ENA- профиль (CLARK LABORATORIES) является то, что на поверхности полистерольных лунок… Положительные результаты серологического тестирования на ANA и ENA могут… В дифференциальной диагностике основных важное значение придается анализу маркеров аутоиммунных заболеваний,…Дифференциальное значение различных маркеров
Аутоиммунных заболеваний
Система цитокинов
1) Интерлейкины (ИЛ-1 – ИЛ-18) – секреторные регуляторные белки иммунной системы, обеспечивающие медиаторное взаимодействие в иммунной системе и… 2) Интерфероны (ИФНα, ИФНβ, ИФНγ) - противовирусные белки с… 3) Факторы некроза опухоли (ФНОα, ФНОβ – лимфотоксин) – цитокины с цитотоксическим и регуляторным…Характеристика отдельных цитокинов
Интерлейкины
Известны 2 типа ИЛ-1: ИЛ-1α и ИЛ-1β. ИЛ-1α - основной медиатор короткодистантного действия. Ведущей формой ИЛ-1 является ИЛ-lβ,… При локальном действии ИЛ-1 является основным медиатором воспалительных… Системно ИЛ-1 действует синергически с ФНОα и ИЛ-6. При повышении концентрации в крови ИЛ-1 воздействует на…Интерфероны
Известно три типа интерферонов: ИФНα (лейкоцитарный), ИФНβ (фибробластный) и ИФНγ (иммунный). ИФНα и ИФНβ обладают сильной противовирусной активностью, ингибируют… ИФНγ синтезируется активированными Т-лимфоцитами (CD4+ Т-клетками и CD8+ Т-клетками, а также NK-клетками) в ответ…Факторы некроза опухоли
Различают два структурно сходных цитокина ФНОα и ФНОβ или лимфотоксин (ЛТ). ФНОα и ФНОβ имеют общий рецептор на клетках. ФНО… Локальное действие ФНО: вызывает экспрессию молекул агдезии на поверхности… ФНО активирует лейкоциты, участвующие в воспалительной реакции: нейтрофилы, эозинофилы и мононуклеарные фагоциты.Колониестимулирующие факторы
Гранулоцитарно-макрофагальный КСФ (ГМ-КСФ) и гранулоцитарный КСФ (Г-КСФ) синтезируется активированными Т-клетками и активированными макрофагами,… Макрофагальный колониестимулирующий фактор (М-КСФ) продуцируется макрофагами,…Хемокины
Хемокины – цитокины, вызывающие направленное движение лейкоцитов. Хемокины вырабатывают многие типы клеток: лейкоциты, тромбоциты, клетки эндотелия, эпителия, фибробласты и другие. Большинство хемокинов являются сильными хемоаттрактантами для нейтрофилов, моноцитов, вызывают дегрануляцию лейкоцитов, участвующих в воспалительных реакциях, увеличивают проницаемость сосудов, регулируют сосудистый тонус.
Факторы роста
ТФРβ ингибирует многие функции лимфоцитов: пролиферацию Т-клеток и созревание цитотоксических клеток, ингибирует также активацию макрофагов и… Семейство факторов роста фибробластоввключает основной фактор роста… PDGF - происходящий из тромбоцитов фактор роста,обладает митогенной активностью к клеткам гладкой мускулатуры,…Методы определения цитокинов
Существующие два методических подхода к выявлению и количественному определению цитокинов в биологических жидкостях - биологический и… Тестирование по биологическим эффектам, как правило, недостаточно… Биологические методы разработаны для определения активности ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИФНγ, ФНОα. Биологическое…Система комплемента
Компоненты комплемента циркулируют в крови в неактивном состоянии. Активация системы комплемента может осуществляться двумя путями - классическим,… Для активации системы комплемента по классическому пути необходимо образование… Классический путь активации системы комплемента начинается с первых, так называемых ранних, компонентов комплемента:…Методы определения активности комплемента
Эритроциты барана трижды отмывают в веронал-мединаловом буфере при… Для построения калибровочной кривой из стандартной 5% взвеси эритроцитов готовят раствор гемоглобина, смешивая 1 часть…Поправочные коэффициенты для определения
Титра комплемента в 50% HE
Определение компонентов комплемента
СЗ-компонент комплемента находится на пересечении между классическим и альтернативным путем активации комплемента. Расщепление СЗ ведет к… • сокращение гладкомышечной мускулатуры • повышение сосудистой проницаемостиГенетически обусловленные состояния дефицита
Компонентов комплемента
Методы исследования фагоцитарной активности гранулоцитов
В пробирку, содержащую 0,1 мл 5% раствора цитрата натрия, вливают 0,2 мл капиллярной крови и добавляют 0,1 мл 2‑миллиардной взвеси… Оценка фагоцитоза in vitro производится в соответствии с фазами реакции: через…НСТ-тест
Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток в крови больного,…Методика исследования
Приготовление раствора: А. 1 % 15 М фосфатного буфера с рН 7,2 с добавлением 0,2% раствора глюкозы и… Б. 0,1% нитросиний тетразолий в изотоническом растворе натрия хлорида. Для получения красителя необходимы длительное…Определение миелопероксидазы
Для проведения цитохимического исследования клеток готовят мазки крови на стекле, фиксируют 4% формалиново-спиртовым раствором (10 частей 40%… Кроме цитохимических исследований, активность миелопероксидазы можно… Увеличение уровня миелопероксидазы наблюдается при острых и хронических бактериальных инфекциях, снижение при…Хемилюминесценция
В настоящее время для исследования ХЛ используются специальные приборы - хемилюминометры, позволяющие количественно оценить интенсивность ХЛ.… В соответствии с задачами исследования при изучении фагоцитоза методом ХЛ… Чрезмерное образование свободных радикалов в организме может приводить к различного рода патологическим последствиям.…Методы аллергодиагностики
Аллергия– иммунная реакция организма, характеризующаяся состоянием повышенной чувствительности к различным веществам антигенной или гаптенной природы в ответ на повторный контакт с ними, сопровождающаяся повреждением структуры и функции клеток, тканей и органов.
Классификация и механизмы аллергических реакций
Клинические особенности, дифференциальная диагностика и лечение аллергических болезней в значительной мере обусловлены механизмом их развития, характером и количеством аллергенного воздействия, типом специфического ответа. А.Д. Адо (1978), исходя из иммунологической концепции патогенеза аллергии, предложил реакции немедленного, антителозависимого типа обосновать как В-зависимые, связанные с образованием антител, и реакции замедленного, антителонезависимого типа как Т-зависимые (клеточные).
Классификация аллергических реакций (по Д. Адо)
| Аллергические реакции ↓ ↓ | ||
| Истинные ↓ ↓ | Ложные (псевдоаллергические) | |
| В-зависимые | Т-зависимые | |
В настоящее время широкое распространение получила классификация, предложенная Р.Gell, R.Coombs, согласно которой в зависимости от механизма иммунной реакции выделяют четыре основных типа аллергических реакций:
I тип – аллергические реакции немедленного типа, которые включают 2 подтипа:
- реагиновый, связанный с выработкой IgЕ и лежащий в основе развития атопических заболеваний;
- анафилактический, обусловленный в основном IgG4 антителами и наблюдающийся при анафилактическом шоке.
II тип – цитотоксический, связанный с образованием IgG (кроме IgG4) и IgМ-антител к детерминантам, имеющимся на собственных клетках. По этому типу протекают некоторые гематологические заболевания (например, аутоиммунная гемолитическая анемия, лекарственный аллергический агранулоцитоз, тромбоцитопения и др.).
III тип – иммунокомплексный, связан с образованием иммунных комплексов аллергенов и аутоаллергенов с IgG и IgМ-антителами и последующим повреждающим действием иммунных комплексов на ткани организма (например, сывороточная болезнь, аллергический васкулит и др.).
IV тип - клеточно-опосредованный (гиперчувствительность замедленного типа - ГЗТ) - связан с образованием сенсибилизированных лимфоцитов - Т-эффекторов (например, контактно-аллергический дерматит и др.). Этот механизм, как один из компонентов, участвует в развитии инфекционно-аллергических заболеваний (туберкулезе, лепре, бруцеллезе, сифилизе и др.).
При многих аллергических заболеваниях одновременно могут участвовать несколько типов аллергических реакций. Например, при атопической бронхиальной астме и анафилактическом шоке - I и II типов, при аутоиммунный заболеваних - II и IV типов.
Независимо от того, к какому типу относится аллергическая реакция, в ее развитии выделяют три стадии: иммунологическую, патохимическую и патофизиологическую.
Сенсибилизация – это иммунологически опосредованное повышение чувствительности организма к антителам (аллергенам) экзо или эндогенного происхождения.
По способу получения сенсибилизацию различают: активную (при искусственном введении или естественном попадании аллергена в организм), пассивную (в эксперименте - введение интактному реципиенту сыворотки или лимфоцитов от активно сенсибилизированного донора), и внутриутробную (сенсибилизация плода).
Сенсибилизация может быть моновалентной (при повышенной чувствительности к одному аллергену), поливалентной (ко многим аллергенам) и перекрестной (повышенная чувствительность сенсибилизированного организма к другим антигенам, имеющим общие антигенные детерминанты с аллергеном, вызывающие сенсибилизацию).
По характеру механизмов, участвующих в развитии аллергии, выделяются следующие стадии:
1. Иммунологическая (с момента введения аллергена в организм, сенсибилизации, образования антител или сенсибилизированных лимфоцитов до соединения их с повторно поступившим или персистирующим в организме аллергеном).
2. Патохимическая стадия или стадия образования медиаторов.
3. Патохимическая стадия (стадия клинических проявлений). Она характеризуется действием образовавшихся медиаторов на клетки, органы и ткани организма.
I. Анафилактический тип реакций гиперчувствительности обусловлен образованием особого типа антител, относящихся к lgE и имеющих высокое сродство (аффинность) к тканевым базофилам (тучным клеткам) и базофилам периферической крови.
При первичном попадании аллергена в организм он захватывается антигенпредставляющими клетками (макрофагами, В-лимфоцитами, дендритными клетками) и подвергается перевариванию (процессингу). В результате переваривания под влиянием лизосомальных ферментов из аллергена образуются пептиды, которые загружаются в пептидсвязывающие бороздки молекул главного комплекса гистосовместимости, транспортируются на поверхность антигенпредставляющих клеток и презентируются для распознавания Т-лимфоцитам-хелперам. Аллергенные пептиды распознаются Т-хелперами 2-го типа, которые в момент распознавания активируются и начинают продуцировать ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-3 и другие цитокины.
Интерлейкин-4 реализует две важные функции:
· индуцирует дифференцировку В-лимфоцитов в плазматические клетки, продуцирующие преимущественно IgE;
· совместно с ИЛ-3 усиливает пролиферацию базофилов обоих типов с экспрессией на их поверхности рецепторов к Fc-фрагменту IgE.
Таким образом, на этом этапе иммунного ответа происходит "наработка" специфических IgE (реагинов) и их фиксация на тканевых базофилах и базофилах периферической крови.
Под влиянием ИЛ-5, ИЛ-3 в аллергическую реакцию включаются эозинофилы: усиливается их миграционная активность, способность продуцировать биологически активные вещества, удлиняется срок их жизни. На поверхности эозинофилов в большом количестве появляются молекулы адгезии, позволяющие эозинофилам прикрепляться к эпителиальным клеткам.
При повторном попадании специфического аллергена в организм он связывается с IgE, фиксированными на мембране базофилов и тучных клеток, что приводит к дегрануляции базофилов обоих типов с высвобождением тромбоцитактивирующего фактора, гистамина, лейкотриенов, простагландинов, гепарина, кининов и других медиаторов. Выделение биологически активных веществ при дегрануляции сопровождается активацией:
· тромбоцитов с выделением серотонина;
· системы комплемента с образованием анафилотоксинов — СЗа и С5а;
· свертывающей системы;
· выделения гистамина и повышения проницаемости сосудов;
· усилению сокращения гладкой мышечной ткани под влиянием лейкотриенов и простагландинов;
Все это обеспечивает развитие острой фазы реакции и ее клинических симптомов (чихание, бронхоспазм, зуд и слезотечение).
Участие эозинофилов в аллергических реакциях немедленного типа характеризуется двумя функциями:
· из эозинофилов выделяются медиаторы, к которым относятся главный основный белок эозинофилов, катионные белки, пероксидаза, нейротоксин, тромбоцитактивирующий фактор, лейкотриены и др. Под влиянием этих медиаторов развиваются симптомы поздней фазы, которые характеризуются развитием клеточного воспаления, разрушением эпителия, гиперсекрецией слизи, сокращением бронхов;
· эозинофилы продуцируют ряд веществ, способствующих подавлению аллергической реакции, уменьшению последствий ее повреждающей силы: гистаминазы — разрушающей гистамин; арилсульфатазы — способствующей инактивации лейкотриенов; фосфолипазы D — нейтрализующей тромбоцитактивирующий фактор; простагландина Е — снижающего выделение гистамина.
На первом этапе выделение медиаторов приводит к увеличению проницаемости сосудов, способствует выходу в ткани Ig, комплемента, усиливает хемотаксис нейтрофилов, эозинофилов. Включение ге-мокоагуляционных механизмов и образование тромбов микрососудистого ложа локализует очаг проникновения аллергена в организм. Все описанное приводит к инактивации и элиминации аллергена.
На втором этапе выделение арилсульфатазы, гистаминазы, фосфолипазы D, простагландина Е2 способствует подавлению функции медиаторов, высвободившихся на первом этапе.
Степень клинических проявлений зависит от соотношения указанных механизмов. В целом патофизиологическая стадия реакции гиперчувствительности 1 типа характеризуется:
· повышением проницаемости микроциркуляторного русла;
· выходом жидкости из сосудов;
· развитием отека;
· серозным воспалением;
· усилением образования слизистых экскретов.
Клинически это проявляется бронхиальной астмой, ринитом, конъюнктивитом, крапивницей, ангионевротическом отеком Квинке, кожным зудом, диареей, увеличением количества эозинофилов в крови и в секретах.
II. Цитотоксический тип реакций гиперчувствительности реализуется гуморальными антителами IgG (кроме lgG4) и lgM. Антигенами, с которыми взаимодействуют антитела при II типе аллергических реакций, могут быть как естественные клеточные структуры (антигенные детерминанты), например, при повреждении клеток крови, так и внеклеточные структуры, например антигены базальной мембраны почечных клубочков.
В результате иммунного ответа продуцируются IgG и IgM, взаимодействие которых с антигенами клетки включает механизмы цитотоксических реакций:
· активация комплемента и реализация комплементопосредованной цитотоксичности;
· активация фагоцитоза;
· активация К-клеток и реализация антителозависимой клеточной цитотоксичиости (АЗКЦ).
В период патохимической стадии активация комплемента сопровождается опсонизацией, активацией миграции воспалительных клеток, усилением фагоцитоза, высвобождением гистамина под влиянием СЗа, С5а, образованием кининов, разрушением мембраны клеток. Активация нейтрофилов, моноцитов, эозинофилов приводит к выделению из них лизосомальных ферментов, образованию супероксидного анион-радикала, синглетного кислорода. Все эти вещества участвуют в развитии повреждения мембраны клеток, в инициации и поддержании перекисного окисления липидов клеточных мембран.
В качестве клинических примеров аллергических реакций II типа можно привести аутоиммунную гемолитическую анемию, аллергический лекарственный агранулоцитоз, тромбоцитопению и др.
Ill. Иммунокомплексный тип реакций гиперчувствительностиреализуется с участием IgG и IgM. Но в отличие от реакций II типа здесь антитела взаимодействуют с растворимыми антигенами, а не с антигенами, находящимися на поверхности клеток. В результате соединения антигена и антитела образуется патогенный циркулирующий иммунный комплекс, который при его фиксации в микроциркуляторном русле приводит к активации комплемента, высвождению лизосомальных ферментов, образованию кининов, супероксидных радикалов, высвобождению гистамина, серотонина, noвреждению эндотелия и к агрегации тромбоцитов со всеми последующими событиями, приводящими к повреждению тканей.
Примером реакций III типа являются сывороточная болезнь, местные реакции по типу феномена Артюса, экзогенные аллергические альвеолиты (легкие фермера, легкие голубеводов и др.), гломерулонефрит, некоторые варианты лекарственной и пищевой аллергии.
IV. Реакции гиперчувствительности замедленного типа. В основе этого типа гиперчувствительности лежит взаимодействие цитотоксического (сенсибилизированного) Т-лимфоцита со специфическим аллергеном, что приводит к высвобождению из Т-клетки целого набора цитокинов, опосредующих проявления замедленной гиперчувствительности.
В период иммунологической стадии в организме созревают цитотоксические (сенсибилизированные) Т-лимфоциты. Во время повторного контакта с антигеном (аллергеном) в патохимической стадии цитотоксические (сенсибилизированные) Т-лимфоциты выделяют следующие цитокины:
· Фактор, угнетающий миграцию макрофагов (МИФ, M1F), который обладает способностью усиливать фагоцитоз и участвует в образовании гранулем;
· Фактор, стимулирующий образование эндогенных пирогенов (ИЛ-1);
· Митогенные (ростовые) факторы (ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-6 и т.д.);
· Хемотаксические факторы, особенно ИЛ-8;
· Гранулоцитарно-моноцитарные колониестимулирующие факторы;
· Лимфотоксины;
· Опухольнекротизирующий фактор;
· Интерфероны (альфа, бета, гамма).
Выделяющиеся из сенсибилизированных Т-лимфоцитов цитокины активируют и привлекают в очаг воспаления клетки моноцитарно-макрофагального ряда.
В том случае, если действие лимфоцитов направлено против вирусов, инфицирующих клетки, или против трансплантационных антигенов, стимулированные Т-лимфоциты трансформируются в клетки, обладающие свойствами клеток-киллеров по отношению к клеткам-мишеням, несущим данный антиген. К таким реакциям относятся: аллергия, формирующаяся при некоторых инфекционных заболеваниях, реакция отторжения трансплантата, некоторые виды аутоиммунных поражений.
Таким образом, во время патофизиологической стадии повреждение клеток и тканей происходит за счет:
· прямого цитотоксического действия Т-лимфоцитов;
· цитотоксического действия Т-лимфоцитов за счет неспецифических факторов (воспалительные цитокины, апоптоз и др.);
· лизосомальных ферментов и иных цитотоксических веществ (N0, оксиданты) активированных клеток моноцитарно-макрофагального ряда.
При аллергических реакциях IV типа среди клеток, инфильтрирующих очаг воспаления, преобладают макрофаги, затем Т-лимфоциты и в последнюю очередь - нейтрофилы.
Примером гиперчувствительности замедленного типа являются аллергический контактный дерматит, реакция отторжения аллотрансплантата, туберкулез, лепра, бруцеллез, микозы, протозойные инфекции, некоторые аутоиммунные заболевания.
Важно учитывать, что в механизмах развития отдельных нозологических форм принимает участие, как правило, не один, а несколько типов реакций гиперчувствительности.
Лабораторные методы аллергодиагностики имеют преимущества в связи с их безопасностью и безвредностью для больного. Важным предварительным этапом аллергообследования является элиминация аллергенов и ремиссия заболевания во избежание получения искаженных, нередко отрицательных результатов лабораторных исследований. Исключать аллергены можно тогда, когда они становятся известными на основании данных анамнеза и предварительного клинического обследования.
Существуют неспецифические и специфические методы аллергодиагностики. К неспецифическим можно отнести: 1) определение общего Ig E; 2) определение уровня ИЛ-4 в сыворотке крови и 3) определение количества CD23+ лимфоцитов (R IgE) в периферической крови. Специфические методы аллергодиагностики включают: 1) определение аллергенспецифических IgE в сыворотке крови; 2) обнаружение специфических антител, связанных с лейкоцитами (базофилами, нейтрофилами), – тест дегрануляции базофилов, реакция повреждения гранулоцитов и др.; 3) определение лимфоцитов, сенсибилизированных к аллергену – реакция торможения миграции лейкоцитов, реакция бласттрансформации лимфоцитов и др.
Определение содержания IgE
Для определения как общего, так и аллергенспецифического IgE используются радиоиммунные, иммуноферментные и хемилюминесцентные методы (RAST – или…Тест дегрануляции базофилов
Тесты, основанные на реакции базофилов в присутствии аллергена, основаны на прямом микроскопическом исследовании базофилов при специальном… Вариант 1. Для постановки реакции используют кровь, стабилизированную… Вариант 2. В лунки планшета вносят 50 мкл суспензии лейкоцитов, приготовленной на забуференном физрастворе из…Тест клеточной антигенной стимуляции базофилов - CAST
В случае IgE-опосредованных аллергических реакций пусковой механизм начинается со связывания аллергена со специфическими молекулами IgE на… В ходе активации клеток внутриклеточные компоненты лизосом, содержащие… Тест клеточной антигенной стимуляции (CAST-тест) – это провокационный тест in vitro, имитирующий развитие…Реакция торможения миграции лейкоцитов
длина миграции с аллергеном Процент миграции (ПМ) = —————————————— х 100 длина миграции в контролеЗадания для самоподготовки
Контрольные вопросы:
1. Характеристика клеток Т-системы.
2. Характеристика клеток В-системы.
3. Методы исследования клеточных иммунных реакций. Выделение лимфоцитов.
4. Методы иммунофенотипирования клеток.
5. Методы оценки функциональной активности лимфоцитов в клеточных реакциях.
6. Смешанная культура лимфоцитов.
7. Варианты постановки РБТЛ.
8. Варианты постановки РТМЛ.
9. Методы исследования апоптоза.
10. Моноцитарно-фагоцитарная система клеток.
11. Методы оценки функциональной активности МФС.
12. Техника постановки реакции фагоцитоза.
13. Постановка НСТ-теста.
14. Определение активности миелопероксидазы, лизосомальных катионных белков.
15. Система комплемента.
16. Определение активности комплемента.
17. Использование хемилюминесценции в иммунологических исследованиях.
18. Методы иммуноферментного анализа.
19. Методы определения концентрации иммуноглобулинов в биологических жидкостях (РРИД, ИФА, турбидиметрический метод).
20. Методы определения циркулирующих иммунных комплексов, криоглобулинов.
21. Методы определения белковых фракций крови.
22. Определение титра ревматоидного фактора.
23. Определение аутоантител методом ИФА, радиоиммунные и иммунофлуоресцентные методы исследования.
24. Роль цитокинов в регуляции иммунного ответа.
25. Методы определения цитокинов.
26. Иммунологические методы исследования при диагностике аллергии.
27. Методы определения Ig E общего и аллергенспецифического.
28. Клеточные реакции при диагностике аллергии.
Ситуационные задачи:
Задача № 1
Объективно: общее состояние удовлетворительное. Температура тела 37,2°С. На коже в области правого бедра участок гиперемии с уплотнением в центре.… При иммунологическом обследовании выявлено: Лейкоциты - 7,5 х 109/лЗадача № 2
Лейкоциты - 9,2 х 109/л Лимфоциты –39%, абс. 3,59 х 109/л СD4+ – 24%, абс. О,86 х 109/лЗадача № 3
При иммунологическом обследовании выявлено: Лейкоциты - 9,2 х 109/л Лимфоциты –39%, абс. 2,2 х 109/лЗадача № 4
При иммунологическом исследовании выявлено: Лейкоциты - 5,5 х 109/л Лимфоциты –37%, абс. 2,03 х 109/лЗадача № 5
При иммунологическом обследовании выявлено: Лейкоциты - 8,2 х 109/л Лимфоциты – 59%, абс. 4,83 х 109/лПриложение
Оценка иммунного статуса
При иммунологическом обследовании
Общий анализ крови
Основные CD маркеры клеток иммунной системы
Субпопуляция лимфоцитов у детей
Функциональная активность фагоцитов периферической крови
| Фагоцитарная активность | НСТ-тест | ||
| Фи | Фч | Клетки, содержащие гранулы,% | ИАН |
| 40-80% | 4-9 | 8-10% в базальных условиях 30-80% в стимулированных условиях | 0,1-0,15 в базальных условиях 0,3-1,5 в стимулированных условиях |
Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови взрослых
Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови детей (г/л) Возраст …Аллергологическая MAST-панель (множественный аллергосорбентный тест) для выявления специфических иммуноглобулинов к аллергенам различных групп
Словарь терминов
Агглютинация - агрегация корпускулярных антигенов под действием антител.Список литературы
1. Васнева Ж.П., Торопова Н.Е., Шарапов В.Ф. Комплексное иммунологическое обследование больных с аллергическими заболеваниями // Клиническая лабораторная диагностика. - 1997. - № 3. С. 4-7.
2. Владимирская Е.Б. Механизмы апоптоза клеток крови // Лабораторная медицина. - 2001. - № 4. - С. 47-55.
3. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2003.
4. Клиническая аллергология: Рук-во для практических врачей / Под ред. акад. РАМН, проф. Р.М. Хаитова – М.: МЕДпресс-информ, 2002. – 624 с.
5. Меньшиков И.В., Бедулева Л.В. Основы иммунологии. Лабораторный практикум. Ижевск: Издательский дом «Удмуртский университет», 2001.
6. Новиков Д.К., Новикова В.И. Оценка иммунного статуса.- М.: Витебский мединститут, 1996.
7. Практикум по иммунологии: Учебное пособие для студ. высш. учеб. заведений / Под ред И.А. Кондратьевой и А.А. Ярилина. – М.: Издательский центр «Академия», 2004.
8. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Возможности иммунологической лабораторной диагностики // Клиническая лабораторная диагностика, 1997. - № 2. - С. 16-23.
9. Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека. Пособие для врачей-лаборантов. Москва, 2001.
10. Современные методы лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний // Методические рекомендации для врачей. Красноярск, 2002
11. Тотолян А.А. Стандартизация методов иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга человека // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - № 8. - С. 38-45.
12. Тотолян А.А. и др. Стандартизация методов иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга человека // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - № 1. - С. 44-50.
13. Федосеева В.Н. и др. Руководство по аллергологии и клинической иммунологии. – Львов, 1997.
Список сокращений и условных обозначений
АОК – антителообразующая клетка АПК – антигенпрезентирующая клетка АТ – антитело– Конец работы –
Используемые теги: Методы, оценки, иммунного, статуса, Учебное, пособие, студентов, лечебного, педиатрического, медико-профилактического, факультетов0.137
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Методы оценки иммунного статуса Учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов
Что будем делать с полученным материалом:
Если этот материал оказался полезным для Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
| Твитнуть |
Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Подпишитесь на Нашу рассылку
Реклама
Информация в виде рефератов, конспектов, лекций, курсовых и дипломных работ имеют своего автора, которому принадлежат права. Поэтому, прежде чем использовать какую либо информацию с этого сайта, убедитесь, что этим Вы не нарушаете чье либо право.
© copyright 1999 - 2024 allRefs.net. Все права защищены. Страница сгенерирована за: 0.228 сек.
Новости и инфо для студентов