рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Определение активности АЛТ и АСТ

Определение активности АЛТ и АСТ - раздел Химия, Рабочая тетрадь по биохимии Образующаяся В Результате Переаминирования Щавелевоуксусная Кислота Декарбокс...

Образующаяся в результате переаминирования щавелевоуксусная кислота декарбоксилируется при помощи анилинцитрата и превращается в ПВК. Последнюю определяют в виде 2,4 динитрофенилгидразина. Поскольку реакционная смесь содержит -кетоглутаровыую кислоту, которая в этих же условиях образует соответствующий гидразон с 2,4 фенилгидразином, пробу экстрагируют толуолом. В толуол переходит только гидразон ПВК, а гидразон -кг остается в водном растворе. При добавлении к толуоловому экстракту спиртовой щелочи развивается стабильное красно-орнажевое окрашивание. Интенсивность которого пропорциональна концентрации ПВК,. Определяют колориметрически на ФЭКе.

Ход работы. В центрифужные пробирку внести по 0,5 мл субстратов для определения АСТ илиАЛТ, пробирки выдержать в термостате 4-5 минут при температуре 25С, затем добавить 0,5 мл сыворотки крови и перемешать.Пробы инкубировать в термостате 20 минут при 25С, после этого добавить 3 капли анилинцитрата, перемешать, оставить при комнатной температуре на 20 минут, в каждую пробирку затем внести по 0,5 мл 0,1% раствора 2,4 динитрофенилгидразина, перемешать, оставить на 5 мин. при комнатной температуре, после добавить насыщенного раствора толуола. Пробирки энергично встряхивают, центрифугируют при 2000 оборотах в тчение 5 минут. К 1,5 мл толуолового экстракта добвить 4,5 мл 2,..5% раствора спиртовой щелочи, перемешивают и оставляют для развития окраски на 10 минут при комнатной температуре.

Параллельно проводят контрольную пробу, содержащую вместо сыворотки крови 0,5 мл дистиллированной воды.

Окраску опытной пробы колориметрировать на ФЭКе с синим светофильтром в кюветах 10 мм против контрольной пробы.

Активность АСТ иАЛТ вычисляют при помощи калибровочных кривых

Результат:

Вывод:

ПРИЛОЖЕНИЕ

Среди множества веществ в организме особенно широко и разнообразно представлены белки. Нет других веществ с такими уникальными свойствами, позволяющими выполнять широкий спектр функций, причем таких, которые не могут быть выполнены никакими другими веществами организма человека. В этом смысле жизнь действительно зависит от тысяч различных белков. Вот почему белки являются незаменимой составной частью пищевого рациона и исключение их из пищи даже на короткий срок невозможно (для людей разного возраста). Это может привести к различным патологическим состояниям, быстро развивается белковая недостаточность (белковое голодание), последствием которой может быть –гипопротеинемия, снижение синтеза ферментов, гормонов и т.д. Недостаточность в белках в какой-то степени может наблюдаться у людей с особыми потребностями в питании (дети, беременные и кормящие матери, пожилые люди, перенесшие оперативные вмешательства, больные, выздоравливающие и т.д.).

При изучении белкового обмена важно знать, достаточно ли организм получает белков с пищей, а в связи с этим необходимо усвоить следующие понятия: норма белка в питании, пищевая ценность белка (соотношение заменимых и незаменимых аминокислот, содержание всех аминокислот), азотистый баланс (разница между поступлением азота в организм с пищей и выведение его с конечными продуктами обмена) и виды азотистого баланса (азотистое равновесие, положительный, отрицательный).

Источники белков для человека – пищевые продукты животного и растительного происхождения (молоко, рыба, мясо, яйцо, творог, соя, фасоль, горох и т.д.). Организм получает белки либо в нативном или в денатурированном виде, но проходить через клеточные мембраны они не могут, поэтому белки пищи никогда не поступают в состав тканей и органов без предварительного гидролиза (протеолиза) в желудочно-кишечном тракте.

Под действием протеолитических ферментов пищеварительных соков (желудочного, панкреатического, кишечного) белки расщепляются до свободных аминокислот (I этап обмена белков в организме)

Назначение этого процесса:

а) лишение белков видовой и тканевой специфичности;

б) обеспечение процесса всасывания, поступления в кровоток, затем в ткани;

в) возможность использования клетками организма в процессе метаболизма.

Поступившие в кровоток аминокислоты быстро поглощаются клетками печени, почек и др. и концентрация свободных АК в крови небольшая (~2,5 г во всем объеме крови), но и внутриклеточное содержание их также невелико. Принято считать, что в норме АК составляют так называемый сбалансированный внутриклеточный пул свободных аминокислот, который характеризует интенсивность процессов поступления и использования (расходования) аминокислот.

Все клетки, за исключением эритроцитов, используют АК прежде всего на анаболические процессы: для синтеза самых разнообразных белков и множества других веществ. И совсем незначительная часть АК подвергается процессам катаболизма (окисления). Последнее становится возможным лишь в 3 случаях:

1) если АК для синтетических процессов в данный момент клетками больше не используются;

2) если организм с пищей получает их больше, чем ему необходимо для белкового синтеза;

3) если организм оказался в особой ситуации дефицита основных энергетических субстратов (глюкозы, ТАГ), т.е. тогда, когда в качестве энергетического топлива вынужденно используются белки (сахарный диабет, голодание, раковые заболевания, состояние невесомости и др.).

Следует помнить, что аминокислоты не откладываются в запас и в организме нет какой-либо специальной формы хранения аминокислот, подобно гликогену или ТАГ.

Исходя из химического строения аминокислот процессы катаболизма можно условно разделить на следующие: а) по – NH2 группе (трансаминирование, дезаминирование, трансдезаминирование); б) по – СООН группе (декарбоксилирование); в) по углеводородному скелету.

Более подробно следует остановиться на процессе трансаминирования аминокислот (переаминировании), в котором всегда участвуют a-аминокислота (донор, поставщик NH2 групы) и a-кетокислота (акцептор -NH2 групы) особенно a-кетоглутаровая. В результате образуется новая аминокислота и соответствующая a-кетокислота. Процесс катализируют ферменты - аминотрансферазы, простетической группой которых является фосфорный эфир витамина В6 (фосфопиридоксаль). Особое внимание должно быть уделено двум ферментам - АлАТ и АсАТ, активность которых в норме достаточно высокая в различных тканях и, особенно, в печени и сердечной мышце, и низкая - в сыворотке крови. Их активность возрастает в крови при патологии печени (профзаболевания при отравлении различными ядами, циррозе, гепатите) – главным образом АлАТ и инфаркте миокарда – АсАТ, что очень важно для диагностики и оценки результатов лечения.

Исключительная роль в процессе трансаминирования принадлежит a-кетоглутаровой и глутаминовой кислотам.

Смысл трансаминирования в его коллекторной (собирательной) функции, т.е. в том, что -NН2 группы от разных аминокислот “собираются” в единственном соединении; в a- глутаминовой кислоте, т.к. акцептором -NН2-групп от большинства аминокислот является a-кетоглутарат.

Таким образом, катаболизм многих аминокислот приводит в конечном итоге к одному единственному метаболиту.

Далее естественно рассмотрение вопросов дальнейшего превращения глутамата, а именно, каким образом аминогруппа отщепляется от Глу и в какой форме выводится из организма.

Изучение этих вопросов требует рассмотрения понятия о дезаминировании аминокислот (потеря аминокислотами аминогруппы в виде свободного аммиака и образования безазотистого остатка аминокислот). Существуют различные виды дезаминирования, в организме человека, главный путь – окислительное дезаминирование, которое может быть двух видов: прямое окислительное дезаминирование и непрямое (трансдездезаминирование).

Было установлено, что в митохондриях ткани печени, мозга, мышц находится НАД+ - зависимый фермент, который способен с большой скоростью дезаминировать одну единственную аминокислоту – глутаминовую - в условиях физиологического значения рН – 7,4. Это фермент – глутаматдегидрогеназа (ГДГ), с участием которого глутаминовая кислота подвергается прямому окислительному дезаминированию с образованием свободного аммиака, a-кетоглутарата, воды и 3 АТФ (с участием ЦТЭ I типа).

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Рабочая тетрадь по биохимии

Челябинская государственная медицинская академия... Министерства здравоохранения Российской федерации... ГБОУ ВПО ЧелГМА Минздрава России...

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Определение активности АЛТ и АСТ

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Нингидриновая рекция
Принцип метода: основан на том, при нагревании с -аминокислотами, а также полипептидами нингидрин образует фиолетово-розоватое окрашивание. При нагревании с нингидрином аминоки

Выберите правильный ответ.
Первичная структура белка – это 1 - аминокислотный состав полипептидной цепи 2 - линейная структура полипептидной цепи, образованная ковалентными связями между аминокислотными ост

ПРИЛОЖЕНИЯ
Шапероны Функции шаперонов. Функции, приписываемые шаперонам, весьма широки. 1)Прежде всего это, обеспечение правильного фолдинга новообра

Прионы как антишапероны
Из предыдущего изложения можно представить, что фолдинг— особенно с участием фолдаз и шаперонов — всегда приводит полипептидную цепь к «правильной», наиболее оптимальной в энергетическом и функцион

Специфичность действия ферментов
Специфичность действия ферментов можно наблюдать на примере амилазы слюны, субстратом для которой является крахмал или гликоген. Амилаза расщепляет крахмал через стадию декстринов до редуц

Ход работы
В 4 пробирки отмерить по 4 мл 0,5% раствора крахмала и по 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Пробирку 1 поместить в кипящую баню, 2 пробирку в ледяную баню, пробирку 3 –в термостат при температуре 3

Влияние рН на активность амилазы
Оптимум - рН для различных ферментов имеет различное значение, это зависит от аминокислотного состава ферментов, оpt рН для -амилазы слюны – 6,8-7,0;

Ход работы
1.В три пробирки вносят по 3 мл буферных растворов с рН 2,0; 7,0; 9,0. 2.Во все пробирки прибавляют по 2 мл 0,5% раствора крахмала и по 1 мл разбавленной в 10 раз слюны. Содержимое пробиро

Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов
Целью работы является установление усиливающего или ингибирующего влияния различных ионов на каталитическую активность ферментов. Так, например, ионы натрия и хлора стимулируют активность амилазы с

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ЗАНЯТИЯ
Количественное определение содержания витамина С – в твердых продуктах Принцип метода: метод основан на способности витамина С восстанавливать

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 9
(семинар) ТЕМА: Введение в обмен веществ. Биологическое окисление. Ферменты биологического окисления ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ: - познакомить студентов

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 10
(семинар) ТЕМА: Митохондриальное окисление Разобщение окислительного фосфорилирования. Цикл трикарбоновых кислот ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ: продолжая изучать биологичес

Семинар
  Темы реферативных сообщений: • Индукторы и ингибиторы мультиферментной системы цитохрома р -450 • Повреждение цитохрома р -450 в каталитическом ци

Ферменты, участвующие в метаболизме ксенобиотиков.
(Различные соединения конкурируют за места связывания с цитохромом Р450) Установленные закономерности функционирования микросомальных монооксигеназ получены пре

Синдром Леша-Нихена (ювенильная гиперурикемия)
Врожденное, наследственное заболевание. У маленьких мальчиков развивается тяжелая гиперурикемия. Гуаннин+фосфорибозилпиросфосфат(ФРПФ)─█─►ГМФ+пирофосфат Ги

Подагра
Из этиологических факторов, вызывающих развитие подагры следу­ет, прежде всего, назвать избыточное поступление пуринов в организм. К этиофакторам подагры следует также отнести и избыточное поступле

Вторичная гиперурикемии
Высокий уровень уратов в плазме крови может наблюдаться при вы­раженном обмене нуклеиновых кислот, быстро растущих злокачественных новообразованиях и их лечении. Терапия опухолей методами радиотера

Ситуационные задачи
1. При исследовании крови больного обнаружено 600 мкмоль/л мочевой кислоты. Сколько мочевой кислоты содержится в крови здоровых людей? Могут ли данные анализа свидетельствовать о конкретной патолог

Ситуационные задачи
При циррозе печени часто наблюдаются нарушения функций центральной нервной системы: снижение памяти, нарушение ориентировочных и поведенческих реакций. Накопление какого метаболита в нервной

Темы реферативных сообщений
• Фенилкетонурия. Биохимические изменения при данной патологии • Альбинизм. Причины и нарушения обмена веществ при данном заболевании. • Алкаптонурия. Биохимические нарушения, соп

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги