рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Раздел Образование
/
Спектрофотометры для измерений в УФ- и видимой области

Реферат Курсовая Конспект

Выберите учебное заведение

Спектрофотометры для измерений в УФ- и видимой области

Спектрофотометры для измерений в УФ- и видимой области - раздел Образование, Лекция 10. Абсорбционная спектроскопия ...

Рис. З1.4 Оптический путь в однолучевом спектрофотометре. Лампа накаливания для видимой области и дейтериевая лампа для УФ-области служат источниками излучения. Поворачивающаяся вогнутая голографическая дифракционная решетка геометрически разлагает луч на спектральные компоненты. Затем весь диапазон длин волн измеряется одновременно диодной линейкой (линейным детектором). Часть луча с помощью светового делителя отводится на контрольный детектор для эталонных измерений

Спектрофотометр – инструмент, определяющий интенсивность пропущенного луча света как функцию его цвета или длины волны. Прибор позволяет с высокой точностью замерить долю света, прошедшую определенный отрезок пути через раствор. Обычные лабораторные спектрофотометры работают в УФ- и видимом диапазоне, иногда также в близком ИК-диапазоне. Инструменты, работающие в среднем ИК-диапазоне, должны удовлетворять дополнительным техническим требованиям, особенно в отношении детектора света и чувствительности. В абсорбционных спектрофотометрах используются один или два луча. Двулучевые приборы измеряют соотношение интенсивностей света, прошедшего по двум оптическим путям (например, через раствор исследуемого образца и через кювету, содержащую только растворитель). В однолучевых спектрофотометрах измеряется интенсивность света по отношению к эталонному (контрольному) значению. В таком случае поглощение образца и растворителя измеряется последовательно - кривая поглощения растворителя записывается подключенным к прибору компьютером и автоматически вычитается из кривой поглощения образца. Ход лучей в однолучевом спектрофотометре показан на рис. З1.4.

Современные спектрофотометры управляются компьютером и содержат различные специализированные программы, такие как построение кинетических кривых, сканирование по температуре, а также анализ кривых поглощения.

Дифференциальные спектры

Дифференциальные спектры крайне полезны в исследованиях процессов, для которых характерны спектральные изменения. Рис. З1.6 показывает дифференциальный спектр поглощения как функцию времени после фотовозбуждения ретиналя в бактериородопсине.

Рис. З1.6. Дифференциальный спектр поглощения бактериородопсина (БР) в мембране, регистрируемый как функция временной задержки после фотовозбуждения. Числа между 1 и 16 соответствуют задержкам между 100 нсек и 600 мксек через неодинаковые интервалы (панели A и Б для времен короче и длиннее 1 мсек, соответственно).

Обратите внимание, как при коротких временных задержках изобестическая точка изменяется в месте, когда кривая дифференциального спектра пересекает ноль, (панель А). Это указывает на существование в реакции интермедиатов с различными спектральными характеристиками. Наличие только одной изобестической точки при больших длительностях временной задержки (панель Б) говорит о том, что более поздние этапы реакции могут рассматриваться в терминах перехода между двумя состояниями.

Развернуть

Открыть в широком формате

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Лекция 10. Абсорбционная спектроскопия

Измерение инфракрасных спектров биологических молекул сильно затруднено... КРАТКОЕ ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ВВЕДЕНИЕ Колебания молекул Относительные положения атомов в молекулах постоянно...

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Спектрофотометры для измерений в УФ- и видимой области

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Лекция 10. Абсорбционная спектроскопия
ВВЕДЕНИЕ В БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ Белки и нуклеиновые кислоты имеют характерные полосы поглощения в УФ-области. Биологические макромолекулы

Ультрафиолетовая и видимая спектральная область
Ультрафиолетовая (УФ) и видимая спектральная область соответствует энергетическим переходам порядка 100-1000 кДж∙моль-1 между основным состоянием и первым возбужденным состоянием (

Абсорбционная спектроскопия белков в УФ-области
С первых лет существования молекулярной биологии поглощение ультрафиолетового излучения белками использовалось для изучения конформации полипептидной цепи. Спектр поглощения белков

Спектры поглощения белков в видимой области
Наличие в белках простетических групп (хромофоров) с сильным поглощением в УФ и видимой области значительно облегчает их спектральные исследования. Зачастую хромофоры сами являются частью активного

Спектры поглощения нуклеиновых кислот
Электронные переходы в сахарных остатках и фосфатных группах нуклеотидов лежат в дальней ультрафиолетовой области (до 200 нм), тогда как ароматические основания поглощают в ближней ультрафиолетовой

АБСОРБЦИОННАЯ спектроскопия в Инфракрасной области
Инфракрасная спектроскопия сегодня с успехом используется в изучении молекулярных механизмов белковой активности, предоставляя информацию о молекулярных взаимодействиях. Так инфракрасный дифференци

Спектрометры инфракрасного диапазона
Абсорбционная спектроскопия используется для изучения биологических макромолекул во всем диапазоне спектра электромагнитного излучения. Инфракрасное излучение занимает обширный диапазон волн длиной

Дисперсионные спектрометры ближнего инфракрасного диапазона
Методологии измерений, связанные с каждым из трех ИК-диапазонов, сильно различаются. Измерения в ближней ИК-области осуществляются с помощью спектрофотометров, похожих по уст

Спектрометры среднего и дальнего инфракрасного диапазона с фурье-преобразованием
Принцип работы современного инфракрасного спектрометра показан на рисунке 57.1. Его ключевым элементом служит интерферометр Майкельсона. Свет с широкой полосой длин волн попадает на интерферометр М

Колебания молекул
При выяснении пространственной структуры молекул необходимо знать длины химических связей и углы между ними. Для большего числа молекул численные значения этих величин известны из рентгеновских диф

Колебательные моды многоатомных молекул
Только нормальные моды молекулы способны к взаимодействию с электромагнитным излучением, приводящим к ИК-поглощению. В случае биологических макромолекул, большинство нормальных мод сильно локализов

Методы повышения разрешения
Aнализ вторичной структуры белков с помощью ИК-спектров далеко не однозначен, поскольку полосы в областях амид-I и амид-III довольно широки и не разрешаются на отдельные компоненты,

Полосы амид-I, амид-II, амид-III
Область амид-I (1600-1700 см-1) пептидной группы наиболее часто используется для исследования вторичной структуры белков. Из-за сильного поглощения легкой воды в области 1640-1650 см

Сравнение вторичной структуры белков с помощью ИК-, КД-спектров и рентгеновских кристаллографических данных.
Перечисленные в этой Лекции методы повышения разрешения инфракрасных спектров белков и полипептидов часто приводят к неоднозначным результатам. В этой связи был разработан принципиально другой подх

ИК-спектроскопия ДНК
Поскольку колебания в нуклеиновых кислотах возникают в разных частях макромолекулы, их полосы поглощения можно обнаружить в нескольких спектральных диапазонах. Основные колебания на

Инфракрасная дифференциальная спектроскопия
ИК-спектры крайне чувствительны к небольшим смещениям координат отдельного атома. К примеру, изменение длины водородной связи всего лишь на 0,002 Å приводит к сдвигу частоты в

Круговой дихроизм, эллиптичность и дисперсия оптического вращения
Поглощение света с определенной поляризацией p веществом выражается через коэффициент экстинкции ep:

Спектрометры кругового дихроизма
Сигнал КД представляет собой разность поглощения лево- и право-циркулярно поляризованного света, которая является величиной порядка 10-3 для обычных образцов, поэтому для его точного изм

Вторичные структуры
Спектры КД a-белков, b-белков, a+b-белков, a/b-белков и неупорядоченных полипептидов показаны на рис. З5.5. Молярная эллиптичность выражена в единицах на децимоль аминокислотного остатка.

Базовые спектры белков
Если бы в первом приближении в спектре КД белка можно было пренебречь сопряжением между различными вторичными структурами в нем, то спектр можно было бы рассматривать как простую су

Мембранные белки
Были предложены различные методы интерпретации КД-спектров мембранных белков в терминах вторичных структур, основанные как на эмпирических, так и на теоретических подходах. Исследов

Белок-нуклеиновые взаимодействия
КД-спектры белок-нуклеиновых комплексов при длинах волн выше 250 нм обусловлены вкладом компонентов вторичных структур нуклеиновых кислот, что позволяет исследовать, к примеру, небольшие изменения