Количественное определение в крови метгемоглобина - раздел Химия, УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ (Метод Л.э.горна).
Цель Работы: ...
(метод Л.Э.Горна).
Цель работы: ознакомиться с методом количественного определения метгемоглобина в крови.
Мотивация: метгемоглобин образуется в результате реакции окисления железа в геме гемоглобина
HbFe+2 + e ¾ MetHbFe+3, т.е. MetHb образование идет под действием любых веществ с дефицитом e¾. Этому способствует изменение конформации белковой части молекулы гемоглобина вследствие окисления ряда функциональных групп белка. В крови здорового человека содержание метгемоглобина не более 3%,что достигается равновесием между реакциями его образования и реакциями восстановления метгемоглобина. Из реакций восстановления наиболее значимыми являются следующие:
причем, НАДФН+Н+ образуется в ключевых реакциях ПФЦ
причем, НАДН+Н+ образуется в ключевых реакциях гликолиза.
причем, данная реакция является неферментативной. Если содержание метгемоглобина в крови превышает 3%- это называется метгемоглобинемия. Метгемоглобинемии делятся на врожденные и приобретенные. Врожденная метгемоглобинемия имеет место при энзимопатиях и гемобинозах. Энзимопатии – генетически обусловленные нарушения синтеза ключевых ферментов, участвующих в восстановлении МеtHb или ключевых ферментов ПФЦ, генерирующих восстановленный НАДФН. Гемоглобинозы делятся на гемоглобинопатии – генетически обусловленные нарушения строения белковой части Hb, возникающие в результате точечных мутаций, и талассемии – состояния развивающиеся в результате генетически обусловленного снижения синтеза какой либо из цепей Hb.
Приобретенные метгемоглобинемии делятся в зависимости от причины на эндогенные и экзогенные. Эндогенная метгемоглобинемия может возникать при различных патологических состояниях или заболеваниях, которые сопровождаются недостаточностью АОС (например: хронический энтерит, хронический гепатит, сахарный диабет и другие).
Экзогенная метгемоглобинемия возникает в случае избыточного поступления в организм человека окислителей, в том числе и лекарственных препаратов со свойствами окислителей. Так как MetHb теряет способность транспортировать О2, метгемоглобинемия сопровождается признаками гемической гипоксии, которые обусловлены различными нарушениями в обмене веществ. Для профилактики и лечения осложнений необходимо контролировать уровень MetHb в крови.
Быстрым, нетрудоемким методом определения % содержания MetHb в крови является фотоколориметрический метод Л.Э.Горна. Этот метод удобен как для профилактического обследования людей, контактирующих с MetHb образователями, так и в гигиенических исследованиях при производственных и пищевых отравлениях некоторыми химическими соединениями (нитриты,
оксиды азота, пары нитробензола, нитроанилин, гексацианоферрат калия, хлорат калия и др.), при проведении токсикологических исследований на животных.
Принцип метода: метод основан на определении оптической плотности раствора, содержащего метгемоглобин. Метгемоглобин избирательно погло-щает свет с длиной волны 619 нм. Содержание метгемоглобина рассчитывают в процентах, принимая за 100% оптическую плотность раствора полностью окисленного (гексацианоферратом) гемоглобина. Эритроциты разрушают в аммиачной среде.
Ход работы:
В три пробирки отмеривают по 7,3 мл 0,25% раствора аммиака. В две пробирки вносят по 0,2 мл крови, взятой у крысы до затравки. Первая пробирка содержит HbO2 (100%). Во вторую пробирку добавляют 1 каплю насыщенного раствора K3[Fe(CN)6], принимая ее за эталон со 100% содержанием MetHb. В третью пробирку отмеривают 0,2 мл крови крысы, отравленной нитритом натрия или другими метгемоглобинообразователями, и определяют в этой крови MetHb.
Пробы оставляют стоять в течение одного часа при комнатной температу-ре, затем растворы фотометрируют, определяя их оптическую плотность. Условия колориметрии: светофильтр красный (длина волны 610 нм), кювета - 10 мм, сравнение против воды.
Для расчета процентного содержания метгемоглобина в исследуемой пробе используют формулу:
Х% MetHb = (D MetHb оп – D HbO2) · 100
D MetHb 100% – D HbO2
DHbO2 – оптическая плотность раствора, не содержащего метгемоглобин (кровь, взятая до затравки крысы);
DMetHb100%. – оптическая плотность раствора, содержащего метгемо-глобин в максимальной концентрации;
DMetHbоп – оптическая плотность раствора, содержащего метгемоглобин в неизвестной концентрации (кровь крысы, затравленной нитритом).
Лабораторная работа № 14
Все темы данного раздела:
Издание второе, переработанное и дополненное.
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов лечебного и медико-профилактического факультетов медицинских ВУЗов, выполняющих практические занятия по курсу биологи
Конкретные задачи.
3.1. Студент должен знать.
3.1.1. Химический состав и физико-химические свойства крови.
3.1.2. Строение гемоглобина и его производных.
3.1.3. Синтез и распад гемо
Количественное определение общего билирубина в сыворотке крови по методу Ендрассика и Клехгорна.
Цель работы: ознакомиться с методом количественного определения общего билирубина в сыворотке крови.
Мотивация: Билирубин - продукт ферментативного окисления гемоглоби
Общего билирубина в сыворотке крови
В крови здорового человека уровень общего билирубина равен 8,5 - 20,5 мкмоль/л (0,4 - 0,8 мг/дл), причем около 75% этого количества приходится на долю ²непрямого билирубина² (6,4
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Источниками восстановленных коферментов для реакций восстановления МеtHb являются:
а) ЦТК
б) цепь терминального окисления (ЦТО)
в) гликолиз д) ПФЦ
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Энзимопатия каких из перечисленных ферментов сопровождается повышением уровня МеtHb:
а) НАДН зависимая МеtHb редуктаза
б) глюкозо – 6 – фосфат ДГ
в) НАДН
ДОПОЛНИТЕ
Метгемоглобинемия – это состояние, при котором уровень метгемо-глобина в крови превышает _______.
Тест 24
Установите соответствие
«для каждого вопроса – один или нескольк
УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ
«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз»
Гипербилирубинемия:
Наблюдается при:
Этапы занятия, контроль усвоения.
№
Этапы проведения занятия
Форма проведения
Время
7.1.
7.2.
Постановка задачи.
Приобретение н
ЗАДАЧА 1
В одном из цехов химического производства, выпускающего совол (смесь тетра и пентохлордифенолов) произошла авария
ЗАДАЧА 2
В одном из цехов химического производства, выпускающего эпихлоргидрин который всасывается через кожу и обладает способностью поражать печень, наблюдалось систематическое превышение предельно допуст
ЗАДАЧА 3
В цехе химического предприятия, выпускающего галовакс (смесь три и тетрахлорнафталинов), который может вызвать гнойничковые заболевания кожи и поражение печени, периодически наблюдалось превышение
ЗАДАЧА 4
В одном из цехов химического производства выпускается металлилхлорид который может вызывать поражения печени и дыхательных путей, имеющего предельно допустимую концентрацию в воздухе рабочей зоны 0
ЗАДАЧА 5
В верховье реки, впадающей в озеро спускают отходы химического производства, выпускающего гексахлорбутадиен 1,3 обладающий наркотическим действием и вызывающим дегенеративные изменения в печени. Пр
ЗАДАЧА 6
Рабочий жалуется на плохое самочувствие, тошноту, ощущение тяжести в правом подреберье, месяц назад лежал в больнице с пневмонией.
Дать оценку состояния функции печени, если:
алан
ЗАДАЧА 7а
На химическом предприятии при обследовании рабочих цеха, выпускающего хлороформ (СНС13) который обладает наркотическим действием вызывает экземы, поражение печени, у основной массы рабо
ЗАДАЧА 7б
На химическом предприятии при обследовании рабочих цеха, выпускающего хлороформ (СНС13), который обладает наркотическим действием, вызывает экземы, дерматиты, поражение печени; у основно
ЗАДАЧА 8
Больной 19 лет, заболел остро; появилось расстройство деятельности желудочно-кишечного тракта, тошнота, рвота, тяжесть в правом подреберье, затем появилась желтушность склер. При обследовании выявл
ЗАДАЧА 9
Больной 53 года перенес 7 лет назад вирусный гепатит, после этого лежал в клинике несколько раз по поводу хронического гепатита.
Дать оценку состояния функций печени если:
аланина
ЗАДАЧА 10
Больная 39 лет, поступила в клинику с коликами (резкие приступо-образные боли) в верхней области живота, иррадиирующие боли в правое плечо, зуд кожи, желтушность кожи, ахоличный малоокрашенный стул
ЗАДАЧА 11
Больной 27 лет возвращается из экспедиции, в которой работал 2 месяца (весна-лето) в поезде почувствовал резкий подъем температуры, озноб; затем температура упала; был 2 раза подъем температуры чер
ЗАДАЧА 12
На химическом производстве в цехе, выпускающем четыреххлористый углерод произошла авария Рабочего участвующего в ликвидации аварии направили на обследование. Оценить состояние функций печени если:
УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ
«для каждого вопроса – несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз»
Условия:
Процессы:
1) сорбционный
(
Продолжительность занятия - 180 минут
2. Цель занятия: систематизация и углубление знаний студентов о биохимических механизмах детоксикации, роли этих механизмов в метаболизме лекарственных препаратов и в развитии пато
Детоксикация
Ферменты Хромопротенины Биохимия Биохимия
гепатоцитов крови
4. Мотивация: знания, полученные на занятии необходимы для успешного лечения больных, профилактики пат
Этапы занятия, контроль усвоения и распределения учебного времени.
№
Этапы проведения занятия
Форма и методы проведения каждого этапа
Время (мин)
7.1.
7.2.
7.3.
&
Словарь терминов
Глутатион трипептид, состоящий из γ-глутаминовой кислоты, цистеина и глицина; является важным компонентом антиоксидантной системы и системы детоксикации.
Изофермент
БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И АДАПТАЦИИ
Общая схема монооксигеназной системы (МОС) печени:
О2
Индукторы цитохрома Р-450
Индукторы цитохрома Р-450 имеют некоторые общие свойства: липофильность, способность связываться с метаболизирующим ферментом, например с цитохромом Р-450, относительно большое время полуэлиминации
Влияние микронутриентов на метаболизм ксенобиотиков
(минеральные компоненты)
Микронутриенты
Статус
Метаболизм ксенобиотиков и активность ферментов
Кальций (дефицит)
Метаболизм половых гормонов
холестерин
Р-450
Метаболизм фенацетина и ацетаминофена (парацетамола)
Роль глутатиона в процессах детоксикации
Биосинтез глутатиона происходит во всех клетках, а катаболизм преимущественно в клетках почек. Внутриклеточный пул включает его восстановленную и окисленную формы, смешанные дисульфиды, тиоэфиры.
Металлотионеины
Это низкомолекулярные белки, содержащие до 30% цистеина и способные связывать ионы тяжелых металлов. Обладают уникальной структурой – молекула содержит 23-33% цистеина без дисульфидных мостиков, ос
Общие свойства мочи.
Реактивы и оборудование.
1.Штатив для пробирок. 2.Водяная баня. 3.Пробирки. 4. Стеклянные трубоч-ки. 5. Стеклянные воронки. 6. Бумажные фильтры или вата. 7. Раствор сульфата меди I
Определение глюкозы.
Реакция Троммера.
Принцип метода: основан на окислении глюкозы гидроксидом меди при нагревании с образованием желтого осадка гидрата закиси меди CuOH или красн
Определение кетоновых тел.
К кетоновым телам относятся ацетоуксусная кислота, b-оксимасляная кислота и ацетон. Наиболее специфичной является проба Либена на ацетон, основанная на образовании нерастворимого в во
Определение белка.
Принцип метода основан на коагуляции белка в моче в присутствии азотной (или 20% раствора сульфосалициловой) кислоты.
Ход работы: к 5 каплям мочи добавляют 1-2 капли а
Количественное определение белка в моче колориметрическим методом с пирогаллоловым красным.
Принцип метода: при взаимодействии белка с пирогаллоловым красным и молибдатом натрия образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски, которого пропорциональна концентрации белк
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Индикаторные ферменты, определяемые в моче для диагностики различных заболеваний:
а) АЛТ
б) урокиназа
в) трансамидиназа
г) амилаза
д) кре
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Патологические компоненты мочи при сахарном диабете:
а) глюкоза
б) ацетон
в) b - оксимасляная кислота
г) ацетоуксусная кислота
д) фенилпировиноградная кислота
Тест 19
Установите соответствие
«для каждого вопроса – несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз, несколько раз или не использован совсем»
Оценка функционального
состояния почек
Словарь терминов
Азотемия – увеличение в крови количества небелковых азотсодержащих веществ
Анурия – отсутствие выделения мочи
Гематурия – обнаружение в моче эритроцитов (или
Алгоритм решения задач.
1. Рассчитать клиренс креатинина.
2. Сравнить с нормой и проанализировать биохимические показатели крови и мочи.
3. Оценить результаты функциональных проб.
4. На основани
ЗАДАЧА 1
1. Мужчина, 35 лет, рост 170 см, вес 96 кг, проходит обследование в связи с поступлением на работу на вредное производство. Жалоб нет.
Анализ крови
ЗАДАЧА 2
1. Мужчина, 40 лет, рост 179 см, вес 93 кг. Жалобы: на головную боль, чаще в утреннее время или после тяжелой физической нагрузки; иногда сопровождаются тошнотой, сердцебиением, мельканием ²му
ЗАДАЧА 3
1. Женщина, 20 лет, рост 172 см, вес 67 кг. Беременность 28 недель. Жалобы на тошноту, отвращение к некоторым продуктам, слабость, головокружение, боли в поясничной области. Объективно: АД 150/90
ЗАДАЧА 4
1. Женщина, 21 год, рост 164 см, вес 72 кг. Жалобы на головную боль, слабость, чувство тяжести в поясничной области, отеки лица и конечностей, уменьшение количества мочи. Из анамнеза: 2 недели наза
ЗАДАЧА 5
1. Мужчина, 36 год, рост 185 см, вес 82 кг. Жалобы: ухудшение состояния в течение последних 2-х месяцев, повышенная утомляемость, головная боль, тошнота, сонливость; ноющие боли в поясничной област
ЗАДАЧА 6
1. Женщина, 29 лет, рост 170 см, вес 59 кг. Жалобы: после переохлаждения появились озноб, головная боль, болезненное мочеиспускание малыми порциями, постоянные боли в поясничной области, слабость,
ЗАДАЧА 7
1. Мужчина, 29 лет, рост 181 см, вес 76 кг. В течение 2-х лет работает в гальваническом цехе, где используются соли ртути. Жалобы: слабость, металлический привкус во рту, болезненность в поясничной
ЗАДАЧА 8
1. Мужчина, 40 лет, рост 180 см, вес 82 кг. Жалобы: после сдавления обеих нижних конечностей вследствие автомобильной травмы появились отечность лица, слабость, головная боль, болезненность в поясн
ЗАДАЧА 9
1. Мужчина, 32 года, рост 166 см, вес 80 кг. Поступил в связи с тяжелым термическим ожогом кожи. При обследовании установлено:
Анализ крови
Анал
ЗАДАЧА 10
1. Мужчина, 36 лет, рост 176 см, вес 65 кг. Страдает хроническим гломерулонефритом в течение 5-ти лет. Жалобы: частый диурез в ночное время (никтурия), слабость, снижение аппетита, тошноту, сердцеб
ЗАДАЧА 11
1. Мужчина, 45 лет, рост 173 см, вес 87 кг. Жалобы на приступообразные боли в правой поясничной области, иррадиирующие в правую паховую область. Приступы купируются спазмолитиками. После приступов
ЗАДАЧА 12
1. Мужчина, 43 года, рост 171 см, вес 80 кг. В связи с подозрением на
острое производственное отравление ССl4, был госпитализирован в
клинику внутренних болезней. Объек
ЗАДАЧА 13
1. Мужчина, 45 лет, рост 175 см, вес 93 кг. Работает на химическом производстве. Неделю назад участвовал в ликвидации аварии на трубопроводе этиленгликоля. Поступил в клинику с жалобами на слабость
ЗАДАЧА 14
1. Мужчина, 27 лет, рост 180 см, вес 75 кг. После перехода на работу в горячий цех появились слабость, быстрая утомляемость и головная боль. Объективно:
Анал
Анализ крови
Гемоглобин
м: 132 – 164 г/л
ж: 120 – 145 г/л
скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
м: 1 – 10 мм/час
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Роль калия в организме:
а) способствует транспорту веществ через мембрану
б) активирует ферменты
в) участвует в свертывающей системе крови
г) сп
УСТАНОВИТЕ СТРОГОЕ СООТВЕТСТВИЕ
Минерал:
Биологическая роль:
1) магний
2) кальций
3) бор
а) активирует гуанилатциклазу
б) является вторичным посредником
в)
А) имеют липидную природу
б) являются олигопептидами
в) являются производными углеводов
г) участвуют в энергообеспечении нервной ткани
д) связываются с опиатными рецепторами
Нарушение работы цикла трикарбоновых кислот при гипоксии
связано с:
а) ингибированием ЦТК кислородом
б) недостатком оксалоацетата
в) ингибированием ЦТК избытком восстановленных коферментов
г) ингибиров
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Взаимосвязь обменов осуществляется благодаря:
а) наличию общих метаболитов
б) наличию общих циклов
в) использованию производных разных обменов при синтез
УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ
«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз или не использован совсем»
Метаболиты:
Пути образован
ПРОГРАММА КУРСА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ.
1. ХИМИЯ БЕЛКОВ
1. Общая характеристика белков. Важнейшие функции белка в живых организмах. Связь между строением молекул белков, и их биологической активностью. Состав и классификация бел
ФЕРМЕНТЫ
7. Ферменты - биологические катализаторы. Отличие ферментов от неорганических катализаторов. Строение ферментов: ферменты как простые и сложные белки. Строение небелковой части ферм
ХИМИЯ И ОБМЕН ЛИПИДОВ
50. Строение нейтральных жиров. Биосинтез триглицеридов. Ди- три- и моноглицериды. Гидролиз жира, жировые константы: Т плавления, иодное число, число омыления, их зависимость от сос
БИОХИМИЯ КРОВИ
69. Составные компоненты крови и их роль в обмене веществ: белки крови, диагностическое значение белковых фракций; ферменты крови (индикаторные, секреторные, экскреторные), небелков
БИОХИМИЯ ПЕЧЕНИ
80. Роль печени в обменных процессах.
81. Обмен углеводов в гепатоцитах. Какие процессы углеводного обмена протекают в гепатоцитах, какие ферментативные системы в них участ
АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМА
93. Образование активных форм кислорода.
94. Антиоксидантная система клетки, состав (ферментативная и неферментативная часть), биологическая роль. Роль витаминов и минерало
Новости и инфо для студентов