Количественное определение белка в моче колориметрическим методом с пирогаллоловым красным. - раздел Химия, УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ Принцип Метода: При Взаимодействии Белка С Пирогаллоловым Красн...
Принцип метода: при взаимодействии белка с пирогаллоловым красным и молибдатом натрия образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски, которого пропорциональна концентрации белка в пробе.
Реактивы: Рабочий реагент – раствор пирогаллолового красного в сукцинат-ном буфере, калибровочный раствор белка с концентрацией 0,50 г/л
Ход работы:
| Отмерить
| Моча
| Калибратор
| Вода дист.
|
| Моча
| 20 мкл
| ─
| ─
|
| Калибратор
| ─
| 20 мкл
| ─
|
| Вода дист.
| ─
| ─
| 20 мкл
|
| Рабочий реагент
| 1000 мкл
| 1000 мкл
| 1000 мкл
|
Пробы перемешать, выдержать 10 мин. при комнатной температуре (18 -25ºС). Измерить оптическую плотность опытной (Dоп) и калибровочной пробы (Dк) против контрольной пробы при λ=598 (578-610) нм. Окраска стабильна в течении 1 ч.
Расчет: концентрацию белка в моче (С) г/л рассчитать по формуле:
С= Dоп/Dк×0,50
где: Dоп = Dк= C = г/л.
Нормальные величины: до 0,094 г/л, (0,141 г/сут)
Вывод:
Количественное определение глюкозы в моче
глюкозооксидазным методом.
Принцип метода: При окислении D-глюкозы кислородом воздуха под действием глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты (смесь фенола и 4 аминоантипирина - 4ААП) с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы.
глюкозооксидаза
Глюкоза + О2 + Н2О глюконолактон + Н2О2
пероксидаза
2 Н2О2 + фенол + 4ААП окрашенное соединение + 4Н2О
Ход работы: в две пробирки вносят по 1 мл рабочего раствора и по 0,5 мл фосфатного буфера. В первую пробирку добавляют 0,02 мл мочи, во вторую – 0,02 мл калибратора (калибровочный, стандартный раствор глюкозы, 10 ммоль/л). Пробы перемешивают, выдерживают 15 мин при температуре 370С в термостате и измеряют оптическую плотность опытной (Dоп) и калиб-ровочной (Dк) проб против рабочего реагента при длине волны 500-546 нм.
Расчет: С = Dоп/Dк · 10 ммоль/л Dоп= Dк =
С =
Содержание глюкозы в суточной моче ммоль/сутки определяют, умножая полученный результат на объем собранной за сутки мочи.
Вывод:
Примечание. При содержании сахара в моче более 1% ее необходимо разводить.
В настоящее время в биохимических лабораториях используется унифи-цированный экспресс-метод анализа мочи на глюкозу с помощью реактив-ной бумаги на глюкозу ²Глюкотест² или с использованием комбиниро-ванных тест-полосок на РН, белок, глюкозу, кетоновые тела и кровь. Тест-полоски, опускают в сосуд с мочой на 1сек. и сравнивают окраску по шкале.
Тестовый контроль по теме: ²Физико-химические свойства, нормальные и патологические компоненты мочи, качественный и количественный анализ патологических компонентов мочи².
Тест 1
Выберите правильный ответ
Глюкоза в крови в пределах нормы, в моче проба на глюкозу положительна. Это объясняется нарушением в почках процесса:
а) фильтрации
б) секреции
в) реабсорбции
г) концентрирования
д) разведения
Тест 2
Выберите правильный ответ
Повышение содержания аммонийных солей и снижение количества мочевины в моче происходит при заболевании:
| а) печени
б) сердца
в) почки
|
г) мочевого пузыря
д) тонкого кишечника
|
Тест 3
Выберите ВСЕ правильнЫе ответы
Кетонурия наблюдается при:
а) сахарном диабете
б) заболевании печени
в) углеводном голодании
г) несахарном диабете
д) заболевании почек
Тест 4
Выберитеь все правильные ответы
Кровь в форме красных кровяных клеток появляется в моче вследствие:
а) воспалительного процесса в нефроне
б) воспалительного процесса мочевых путей
в) травмы мочевыводящих путей
г) воспалительного процесса в селезенке
д) гемолиза эритроцитов
Тест 5
Выберите все правильные ответы
Появление прямого билирубина и уробилиногена в моче наблюдается:
а) гепатите
б) обтурационной желтухе
в) заболевании почек
г) гемолитической желтухе
д) заболевании селезенки
Тест 6
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Понижение плотности мочи наблюдается при:
а) полиурии
б) олигурии
в) протеинурии
г) снижении фильтрации
д) глюкозурии
Тест 7
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Полиурия наблюдается при:
а) диарее
б) сахарном диабете
в) заболевании печени
г) несахарном диабете
д) мочекаменной болезни
Тест 8
Выберите все правильные ответы
Патологические компоненты мочи:
а) β-оксимасляная кислота
б) ацетоуксусная кислота
в) мочевая кислота
г) гиппуровая кислота
д) порфирины
Тест 9
Все темы данного раздела:
Издание второе, переработанное и дополненное.
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов лечебного и медико-профилактического факультетов медицинских ВУЗов, выполняющих практические занятия по курсу биологи
Конкретные задачи.
3.1. Студент должен знать.
3.1.1. Химический состав и физико-химические свойства крови.
3.1.2. Строение гемоглобина и его производных.
3.1.3. Синтез и распад гемо
Количественное определение в крови метгемоглобина
(метод Л.Э.Горна).
Цель работы: ознакомиться с методом количественного определения метгемоглобина в крови.
Мотивация: метгемог
Количественное определение общего билирубина в сыворотке крови по методу Ендрассика и Клехгорна.
Цель работы: ознакомиться с методом количественного определения общего билирубина в сыворотке крови.
Мотивация: Билирубин - продукт ферментативного окисления гемоглоби
Общего билирубина в сыворотке крови
В крови здорового человека уровень общего билирубина равен 8,5 - 20,5 мкмоль/л (0,4 - 0,8 мг/дл), причем около 75% этого количества приходится на долю ²непрямого билирубина² (6,4
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Источниками восстановленных коферментов для реакций восстановления МеtHb являются:
а) ЦТК
б) цепь терминального окисления (ЦТО)
в) гликолиз д) ПФЦ
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Энзимопатия каких из перечисленных ферментов сопровождается повышением уровня МеtHb:
а) НАДН зависимая МеtHb редуктаза
б) глюкозо – 6 – фосфат ДГ
в) НАДН
ДОПОЛНИТЕ
Метгемоглобинемия – это состояние, при котором уровень метгемо-глобина в крови превышает _______.
Тест 24
Установите соответствие
«для каждого вопроса – один или нескольк
УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ
«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз»
Гипербилирубинемия:
Наблюдается при:
Этапы занятия, контроль усвоения.
№
Этапы проведения занятия
Форма проведения
Время
7.1.
7.2.
Постановка задачи.
Приобретение н
ЗАДАЧА 1
В одном из цехов химического производства, выпускающего совол (смесь тетра и пентохлордифенолов) произошла авария
ЗАДАЧА 2
В одном из цехов химического производства, выпускающего эпихлоргидрин который всасывается через кожу и обладает способностью поражать печень, наблюдалось систематическое превышение предельно допуст
ЗАДАЧА 3
В цехе химического предприятия, выпускающего галовакс (смесь три и тетрахлорнафталинов), который может вызвать гнойничковые заболевания кожи и поражение печени, периодически наблюдалось превышение
ЗАДАЧА 4
В одном из цехов химического производства выпускается металлилхлорид который может вызывать поражения печени и дыхательных путей, имеющего предельно допустимую концентрацию в воздухе рабочей зоны 0
ЗАДАЧА 5
В верховье реки, впадающей в озеро спускают отходы химического производства, выпускающего гексахлорбутадиен 1,3 обладающий наркотическим действием и вызывающим дегенеративные изменения в печени. Пр
ЗАДАЧА 6
Рабочий жалуется на плохое самочувствие, тошноту, ощущение тяжести в правом подреберье, месяц назад лежал в больнице с пневмонией.
Дать оценку состояния функции печени, если:
алан
ЗАДАЧА 7а
На химическом предприятии при обследовании рабочих цеха, выпускающего хлороформ (СНС13) который обладает наркотическим действием вызывает экземы, поражение печени, у основной массы рабо
ЗАДАЧА 7б
На химическом предприятии при обследовании рабочих цеха, выпускающего хлороформ (СНС13), который обладает наркотическим действием, вызывает экземы, дерматиты, поражение печени; у основно
ЗАДАЧА 8
Больной 19 лет, заболел остро; появилось расстройство деятельности желудочно-кишечного тракта, тошнота, рвота, тяжесть в правом подреберье, затем появилась желтушность склер. При обследовании выявл
ЗАДАЧА 9
Больной 53 года перенес 7 лет назад вирусный гепатит, после этого лежал в клинике несколько раз по поводу хронического гепатита.
Дать оценку состояния функций печени если:
аланина
ЗАДАЧА 10
Больная 39 лет, поступила в клинику с коликами (резкие приступо-образные боли) в верхней области живота, иррадиирующие боли в правое плечо, зуд кожи, желтушность кожи, ахоличный малоокрашенный стул
ЗАДАЧА 11
Больной 27 лет возвращается из экспедиции, в которой работал 2 месяца (весна-лето) в поезде почувствовал резкий подъем температуры, озноб; затем температура упала; был 2 раза подъем температуры чер
ЗАДАЧА 12
На химическом производстве в цехе, выпускающем четыреххлористый углерод произошла авария Рабочего участвующего в ликвидации аварии направили на обследование. Оценить состояние функций печени если:
УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ
«для каждого вопроса – несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз»
Условия:
Процессы:
1) сорбционный
(
Продолжительность занятия - 180 минут
2. Цель занятия: систематизация и углубление знаний студентов о биохимических механизмах детоксикации, роли этих механизмов в метаболизме лекарственных препаратов и в развитии пато
Детоксикация
Ферменты Хромопротенины Биохимия Биохимия
гепатоцитов крови
4. Мотивация: знания, полученные на занятии необходимы для успешного лечения больных, профилактики пат
Этапы занятия, контроль усвоения и распределения учебного времени.
№
Этапы проведения занятия
Форма и методы проведения каждого этапа
Время (мин)
7.1.
7.2.
7.3.
&
Словарь терминов
Глутатион трипептид, состоящий из γ-глутаминовой кислоты, цистеина и глицина; является важным компонентом антиоксидантной системы и системы детоксикации.
Изофермент
БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И АДАПТАЦИИ
Общая схема монооксигеназной системы (МОС) печени:
О2
Индукторы цитохрома Р-450
Индукторы цитохрома Р-450 имеют некоторые общие свойства: липофильность, способность связываться с метаболизирующим ферментом, например с цитохромом Р-450, относительно большое время полуэлиминации
Влияние микронутриентов на метаболизм ксенобиотиков
(минеральные компоненты)
Микронутриенты
Статус
Метаболизм ксенобиотиков и активность ферментов
Кальций (дефицит)
Метаболизм половых гормонов
холестерин
Р-450
Метаболизм фенацетина и ацетаминофена (парацетамола)
Роль глутатиона в процессах детоксикации
Биосинтез глутатиона происходит во всех клетках, а катаболизм преимущественно в клетках почек. Внутриклеточный пул включает его восстановленную и окисленную формы, смешанные дисульфиды, тиоэфиры.
Металлотионеины
Это низкомолекулярные белки, содержащие до 30% цистеина и способные связывать ионы тяжелых металлов. Обладают уникальной структурой – молекула содержит 23-33% цистеина без дисульфидных мостиков, ос
Общие свойства мочи.
Реактивы и оборудование.
1.Штатив для пробирок. 2.Водяная баня. 3.Пробирки. 4. Стеклянные трубоч-ки. 5. Стеклянные воронки. 6. Бумажные фильтры или вата. 7. Раствор сульфата меди I
Определение глюкозы.
Реакция Троммера.
Принцип метода: основан на окислении глюкозы гидроксидом меди при нагревании с образованием желтого осадка гидрата закиси меди CuOH или красн
Определение кетоновых тел.
К кетоновым телам относятся ацетоуксусная кислота, b-оксимасляная кислота и ацетон. Наиболее специфичной является проба Либена на ацетон, основанная на образовании нерастворимого в во
Определение белка.
Принцип метода основан на коагуляции белка в моче в присутствии азотной (или 20% раствора сульфосалициловой) кислоты.
Ход работы: к 5 каплям мочи добавляют 1-2 капли а
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Индикаторные ферменты, определяемые в моче для диагностики различных заболеваний:
а) АЛТ
б) урокиназа
в) трансамидиназа
г) амилаза
д) кре
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Патологические компоненты мочи при сахарном диабете:
а) глюкоза
б) ацетон
в) b - оксимасляная кислота
г) ацетоуксусная кислота
д) фенилпировиноградная кислота
Тест 19
Установите соответствие
«для каждого вопроса – несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз, несколько раз или не использован совсем»
Оценка функционального
состояния почек
Словарь терминов
Азотемия – увеличение в крови количества небелковых азотсодержащих веществ
Анурия – отсутствие выделения мочи
Гематурия – обнаружение в моче эритроцитов (или
Алгоритм решения задач.
1. Рассчитать клиренс креатинина.
2. Сравнить с нормой и проанализировать биохимические показатели крови и мочи.
3. Оценить результаты функциональных проб.
4. На основани
ЗАДАЧА 1
1. Мужчина, 35 лет, рост 170 см, вес 96 кг, проходит обследование в связи с поступлением на работу на вредное производство. Жалоб нет.
Анализ крови
ЗАДАЧА 2
1. Мужчина, 40 лет, рост 179 см, вес 93 кг. Жалобы: на головную боль, чаще в утреннее время или после тяжелой физической нагрузки; иногда сопровождаются тошнотой, сердцебиением, мельканием ²му
ЗАДАЧА 3
1. Женщина, 20 лет, рост 172 см, вес 67 кг. Беременность 28 недель. Жалобы на тошноту, отвращение к некоторым продуктам, слабость, головокружение, боли в поясничной области. Объективно: АД 150/90
ЗАДАЧА 4
1. Женщина, 21 год, рост 164 см, вес 72 кг. Жалобы на головную боль, слабость, чувство тяжести в поясничной области, отеки лица и конечностей, уменьшение количества мочи. Из анамнеза: 2 недели наза
ЗАДАЧА 5
1. Мужчина, 36 год, рост 185 см, вес 82 кг. Жалобы: ухудшение состояния в течение последних 2-х месяцев, повышенная утомляемость, головная боль, тошнота, сонливость; ноющие боли в поясничной област
ЗАДАЧА 6
1. Женщина, 29 лет, рост 170 см, вес 59 кг. Жалобы: после переохлаждения появились озноб, головная боль, болезненное мочеиспускание малыми порциями, постоянные боли в поясничной области, слабость,
ЗАДАЧА 7
1. Мужчина, 29 лет, рост 181 см, вес 76 кг. В течение 2-х лет работает в гальваническом цехе, где используются соли ртути. Жалобы: слабость, металлический привкус во рту, болезненность в поясничной
ЗАДАЧА 8
1. Мужчина, 40 лет, рост 180 см, вес 82 кг. Жалобы: после сдавления обеих нижних конечностей вследствие автомобильной травмы появились отечность лица, слабость, головная боль, болезненность в поясн
ЗАДАЧА 9
1. Мужчина, 32 года, рост 166 см, вес 80 кг. Поступил в связи с тяжелым термическим ожогом кожи. При обследовании установлено:
Анализ крови
Анал
ЗАДАЧА 10
1. Мужчина, 36 лет, рост 176 см, вес 65 кг. Страдает хроническим гломерулонефритом в течение 5-ти лет. Жалобы: частый диурез в ночное время (никтурия), слабость, снижение аппетита, тошноту, сердцеб
ЗАДАЧА 11
1. Мужчина, 45 лет, рост 173 см, вес 87 кг. Жалобы на приступообразные боли в правой поясничной области, иррадиирующие в правую паховую область. Приступы купируются спазмолитиками. После приступов
ЗАДАЧА 12
1. Мужчина, 43 года, рост 171 см, вес 80 кг. В связи с подозрением на
острое производственное отравление ССl4, был госпитализирован в
клинику внутренних болезней. Объек
ЗАДАЧА 13
1. Мужчина, 45 лет, рост 175 см, вес 93 кг. Работает на химическом производстве. Неделю назад участвовал в ликвидации аварии на трубопроводе этиленгликоля. Поступил в клинику с жалобами на слабость
ЗАДАЧА 14
1. Мужчина, 27 лет, рост 180 см, вес 75 кг. После перехода на работу в горячий цех появились слабость, быстрая утомляемость и головная боль. Объективно:
Анал
Анализ крови
Гемоглобин
м: 132 – 164 г/л
ж: 120 – 145 г/л
скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
м: 1 – 10 мм/час
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Роль калия в организме:
а) способствует транспорту веществ через мембрану
б) активирует ферменты
в) участвует в свертывающей системе крови
г) сп
УСТАНОВИТЕ СТРОГОЕ СООТВЕТСТВИЕ
Минерал:
Биологическая роль:
1) магний
2) кальций
3) бор
а) активирует гуанилатциклазу
б) является вторичным посредником
в)
А) имеют липидную природу
б) являются олигопептидами
в) являются производными углеводов
г) участвуют в энергообеспечении нервной ткани
д) связываются с опиатными рецепторами
Нарушение работы цикла трикарбоновых кислот при гипоксии
связано с:
а) ингибированием ЦТК кислородом
б) недостатком оксалоацетата
в) ингибированием ЦТК избытком восстановленных коферментов
г) ингибиров
ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ
Взаимосвязь обменов осуществляется благодаря:
а) наличию общих метаболитов
б) наличию общих циклов
в) использованию производных разных обменов при синтез
УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ
«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз или не использован совсем»
Метаболиты:
Пути образован
ПРОГРАММА КУРСА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ.
1. ХИМИЯ БЕЛКОВ
1. Общая характеристика белков. Важнейшие функции белка в живых организмах. Связь между строением молекул белков, и их биологической активностью. Состав и классификация бел
ФЕРМЕНТЫ
7. Ферменты - биологические катализаторы. Отличие ферментов от неорганических катализаторов. Строение ферментов: ферменты как простые и сложные белки. Строение небелковой части ферм
ХИМИЯ И ОБМЕН ЛИПИДОВ
50. Строение нейтральных жиров. Биосинтез триглицеридов. Ди- три- и моноглицериды. Гидролиз жира, жировые константы: Т плавления, иодное число, число омыления, их зависимость от сос
БИОХИМИЯ КРОВИ
69. Составные компоненты крови и их роль в обмене веществ: белки крови, диагностическое значение белковых фракций; ферменты крови (индикаторные, секреторные, экскреторные), небелков
БИОХИМИЯ ПЕЧЕНИ
80. Роль печени в обменных процессах.
81. Обмен углеводов в гепатоцитах. Какие процессы углеводного обмена протекают в гепатоцитах, какие ферментативные системы в них участ
АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМА
93. Образование активных форм кислорода.
94. Антиоксидантная система клетки, состав (ферментативная и неферментативная часть), биологическая роль. Роль витаминов и минерало
Новости и инфо для студентов