рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Раздел Химия
/
Определение коллагеназной активности

Реферат Курсовая Конспект

Выберите учебное заведение

Определение коллагеназной активности

Определение коллагеназной активности - раздел Химия, Исследование некоторых физико-химических свойств протеиназы Penicillium wortmannii Определение Коллагеназной Активности. Коллагеназную Активность Определ...

Определение коллагеназной активности.

Коллагеназную активность определяли по содержанию оксипролина в смеси, образовавшегося в результате действия фермента на нативный коллаген. С этой целью готовили реактив для окисления 28,2 г хлорамина Т растворяли в 40см3 воды для получения 0,05М концентрации, добавляли 60см3 ацитат-цитратного буфера с рН 6,0. К 2см3 анализируемой пробы, содержащей 2 - 20 см3 оксипролина, приливали 1мл реактива для окисления, встряхивали и оставляли на 20 минут при комнатной температуре.

Затем в смесь вносили 2 - 1 см3 4М хлорной кислоты, встряхивали и через 5 минут приливали 3см3 10 раствора n-диметиламинобензальдегида в метилцеллосольфе. Пробу нагревали 15 минут в водяной бане при 150оС и после охлаждения фотометрировали с зелёным светофильтром на ФЭК-56М 555нм. Гидролиз коллагена вели в следующих условиях 20 мг нативного коллагена обрабатывали исследуемым ферментным препаратом в присутствии буферной системы с рН 7,0 так, чтобы общий объём составил 25см3. Смесь инкубировали в течение 1 часа при 37oС. Контролем служили пробы, инкубированные в тех же условиях, но без фермента, предварительно остановив реакцию внесением 0,5см3 этанола и центрифугированием смеси в течение 15 минут при 6000 чмин-1. Активность коллагеназы выражали либо в ммолях оксипролина на 1 мг белка за 60 минут, либо в процентах растворения. 2.4 Определение молекулярной массы фермента.

Молекулярную массу определяли с помощью гель-фильтрации на сефадексе У-100. Расчёт проводили по формуле LgM 5,941-0,847 V V0 , где V - объём выхода фермента V0 - свободный объём колонки. 2.5

Развернуть

Открыть в широком формате

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Исследование некоторых физико-химических свойств протеиназы Penicillium wortmannii

Вещества белковой природы, способные каталитически ускорять химические реакции, называют ферментами. Роль ферментов в жизнедеятельности животных, растений и микроорганизмов… Биологические катализаторы по ряду признаков резко отличаются от неорганических катализаторов.

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Определение коллагеназной активности

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Протеиназы микробного происхождения
Протеиназы микробного происхождения. Протеолитические ферменты синтезируются практически всеми живыми существами. В промышленных целях как источник протеиназ используются животные ткани, растения и

Выделение и очистка препаратов протеиназы
Выделение и очистка препаратов протеиназы. Современный уровень науки и техники позволяет получить не только комплексные, но и гомогенные, кристаллические ферменты. Их, как правило, выделяют

Расщепление коллагенсодержащего сырья и его применение
Расщепление коллагенсодержащего сырья и его применение. Перспективное направление обработки коллагенсодержащего сырья - его ферментация. Авторами обзора 5 показано, что употребляемые

Материалы и методы исследования
Материалы и методы исследования. Определение величины рН. Величину рН определяли потенциометрически на рН-метре ЛПУ-01. Для измерений значений рН растворов в температуре отличной от 20oС, применяли

Определение содержания аминного азота
Определение содержания аминного азота. Метод основан на образовании цветного комплекса при взаимодействии аминогрупп аминокислот с гидроксидом меди. В пробирку, содержащую 100 мг сухого медн

Определение гомогенности очищенных препаратов
Определение гомогенности очищенных препаратов. Электрофорез проводили по методу Дэвиса на приборе фирмы Reanol Венгрия в щелочной буферной системе, рН 8,9. Концентрация акриламина в мелкопор

Идентификация протеиназ в ПААГ
Идентификация протеиназ в ПААГ. Для проявления в гелях полос с протеиназой их выдерживали в денатурированном растворе гемоглобина 2 концентрации в течение 15 - 30 минут при температуре 30oС. Затем

Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF
Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF. Для выделения ферментов из различных сред в лабораторных условиях и в промышленности чаще всего применяют органические растворите

Фракционирование протеолитического комплексного препарата ферментов
Фракционирование протеолитического комплексного препарата ферментов. Полученный осаждением органическими растворителями препарат нами назван протовортманин Г10х. В дальнейшем представляло ин

Влияние температуры и рН на активность фермента
Влияние температуры и рН на активность фермента. Нами была поставлена цель определить рН и температурные оптимумы действия выделенных протеиназ Penicillium wortmannii 2091 и дать их сравнительную х

Исследование процессов кислотной и термической инактивации
Исследование процессов кислотной и термической инактивации. Изучение термо- и рН-стабильности ферментов часто несёт прикладной характер. Исследование этих характеристик проводится остаточной

Влияние ионов металлов и ингибиторов на активный центр фермента
Влияние ионов металлов и ингибиторов на активный центр фермента. Главным признаком, используемым при отношении протеолитических ферментов к тому или иному классу, является строение каталитического

Межпредметность - современный принцип обучения
Межпредметность - современный принцип обучения. Совершенствование содержания образования в школе опирается на комплексное использование в обучении межпредметных связей. Это является одним из критер

Межпредметные связи на уроках химии
Межпредметные связи на уроках химии. Реализация межпредметных связей химии с другими дисциплинами предполагает осуществление комплексного подхода к отбору учебного материала, т.е. привлечени