рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Практикум

Практикум - раздел Биотехнологии, Основы биотехнологии Работа № 1. Знакомство С Питательными Среды Для Культивирования Изолированных...

Работа № 1. Знакомство с питательными среды для культивирования изолированных клеток и тканей растений.

Основные компоненты питательных сред:

- макроэлементы (азот, фосфор, калий, кальций, сера, магний, железо);

- микроэлементы (бор, цинк, медь, марганец, кобальт, йод, молибден);

- витамины;

- аминокислоты, пептиды (гидрализаты казеина), углеводы (сахароза или глюкоза);

- фитогормоны (ауксины и цитокинины) и другие биорегуляторы;

- этилендиаминотетрауксусная кислота (ЭДТА).

Источники ауксинов в питательных средах - 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д), индолилуксусная кислота (ИУК), индолилмасляная кислота (ИМК), нафтилуксусная кислота (НУК); источники цитокининов - аденин, кинетин, 6-бензиламинопурин (6-БАП), зеатин, 2ip. Для регуляции роста используют гиббереловую кислоту (ГК). ИУК в 30 раз менее активна, чем 2,4-Д. Для индукции каллуса используют высокие концентрации 2,4-Д. Ауксины вызывают процессы дедифференцировки клетки, подготавливают ее к делению. Затем цитокинины инициируют деление клеток. Молекулярный механизм действия ауксинов связан с индукцией ими синтеза главной протеинкиназы клеточного деления Р34cdc2, а цитокинины индуцируют синтез циклинов, регулирующих прохождение клетки по клеточному циклу. Таким образом, действие этих биорегуляторов (растительных гормонов) проявляется только при последовательном или одновременном внесении их в среду.

Для культивирования клеток, тканей и органов растений используют следующие питательные среды.

Среда Мурасиге-Скуга

Компоненты питательной среды, мг/л
NH4NO3 KJ 0,83
KNO3 FeSO4×7H2O 27,8
CaCl2×2H2O Na2EDTA×2H2O 37,3
MgSO4×7H2O Тиамин-HCl 0,1
KH2PO4 Пиридоксин-HCl 0,5
MnSO4×4H2O 24,1 Никотиновая к-та 0,5
CoCl2×6H2O 0,025 Мезоинозит
ZnSO4×7H2O 8,6 Глицин 2,0
CuSO4×5H2O 0,025 Сахароза
Na2MoO4×2H2O 0,25    
рН 5,6-5,8

 

 

Среда Уайта

Компоненты питательной среды, мг/л
Ca(NO3)2 CuSO4×5H2O 0,02
MgSO4×7H2O ZnSO4 1,5
Na2SO4 Na2MoO4×2H2O 0,0025
KNO3 KJ 0,75
KCl Пиридоксин HCl 0,1
NaH2PO4 16,5 Тиамин-HCl 0,1
H3BO3 1,5 Никотиновая к-та 0,5
MnSO4 4,5 Глицин 3,0
Fe2(SO4)3 2,5 Сахароза
рН 5,6-5,8

Среда Гамборга и Эвелега (В5)

Компоненты питательной среды, мг/л
NaH2PO4 Na2EDTA×2H20 30,0
KNO3 Na2MoO4×2H2O 0,25
(NH4)2SO4 KJ 0,75
MgSO4×7H2O FeSO4×7H2O
CaCl2×2H2O Тиамин-HCl
H3BO3 3,0 Пиридоксин HCl 1,0
MnSO4×4H2O 10,0 Никотиновая к-та 1,0
CoCl2×6H2O 0,025 Мезоинозит
CuSO4×5H2O 0,025 2,4-Д 2,0
ZnSO4×7H2O 2,0 Сахароза
рН 5,8

1. Сравните составы трех питательных сред. Найдите отличия. Сгруппируйте составные компоненты питательных сред (макроэлементы, микроэлементы, молекулы пластического обмена, биорегуляторы, ЭДТА). Свяжите состав питательных сред с молекулярными процессами в культивируемых клетках, тканях, органах.

2. Питательные среды готовят из «маточных» растворов, которые хранят при низкой температуре. В «маточных» растворах повышена концентрация макроэлементов в 10-20 раз, микроэлементов – в 100-1000 раз, витаминов – в 1000 раз. Предложите варианты «маточных» растворов солей макроэлементов, Fe-хелата (FeSO4×7H2O + Na2EDTA×2H20), солей микроэлементов, витаминов, биорегуляторов для быстрого приготовления рабочих питательных сред для культивирования.

 

Работа 2. Цветные реакции на белки и аминокислоты.

Диагностическое значение и принцип реакций. Цветные реакции дают возможность обнаружить присутствие белка в биологических жидкостях и получить представление об его аминокислотном составе.

Биуретовая реакция открывает пептидную связь в белке. Ее способны давать вещества, которые содержат не менее двух пептидных связей. При добавлении сернокислой меди к сильнощелочному раствору белка или полипептида образуются соединения меди с пептидной группировкой, окрашенные в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет в зависимости от длины полипептидной цепи. Раствор белка дает сине-фиолетовое окрашивание, а продукты неполного его гидролиза (пептоны) - розовое или красное окрашивание.

Нингидриновая реакция характерна для a-аминогрупп. Растворы белка, a-аминокислот и пептидов при нагревании с нингидрином дают синее или фиолетовое окрашивание. В этой реакции a-аминокислоты и пептиды окисляются нингидрином и подвергаются окислительному дезаминированию и декарбоксилированию с образованием аммиака, альдегида и СО2. Нингидрин восстанавливается и связывается со второй молекулой нингидрина посредством молекулы аммиака, образуя продукты конденсации, окрашенные в синий цвет (комплекс Руэмана). Нингидриновая реакция используется для количественного определения a-аминокислот в аминокислотных анализаторах.

Ксантопротеиновая реакция открывает наличие в белках циклических аминокислот - триптофана, фенилаланина, тирозина, содержащих в своем составе бензольное ядро. Большинство белков при нагревании с концентрированной азотной кислотой дает желтое окрашивание, переходящее в оранжевое при подщелачивании. Реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца этих аминокислот с образованием нитросоединений желтого цвета.

Реакция Миллона открывает в белке циклическую аминокислоту тирозин. При добавлении к раствору белка реактива Миллона, состоящего из смеси азотнокислых и азотистокислых солей закиси и окиси ртути, растворенных в концентрированной азотной кислоте, образуется белый осадок (действие соли тяжелого металла), окрашивающийся при нагревании в красный цвет. Реактив Миллона дает окрашивание почти со всеми фенолами, и в случае белков реакция обусловлена присутствием в них фенольной группы тирозина. Белки, не содержащие тирозина, этой реакции не дают. Следует избегать прибавления избытка реактива Миллона, поскольку он содержит азотную кислоту, которая при взаимодействии с белком может дать желтое окрашивание (ксантопротеиновую реакцию), маскирующее реакцию Миллона.

Реакция Фоля указывает на присутствие в белке аминокислот цистина и цистеина, содержащих слабосвязанную серу. Метионин, хотя и является содержащей серу аминокислотой, этой реакции не дает, поскольку сера в нем связана прочно. Реакция состоит в том, что при кипячении белка с реактивом Фоля (плюмбит натрия в избытке NaОН) под действием щелочи от цистеина или цистина легко отщепляется сера в виде сернистого натрия, который с плюмбитом дает черный или бурый осадок сернистого свинца.

Реактивы, исследуемый материал

1. Раствор едкого натра, 100 г/л. 2. Раствор сернокислой меди, 10 г/л. 3. Раствор нингидрина, 5 г/л. 4. Азотная кислота концентрированная. 5. Реактив Миллона. 6. Раствор фенола, 1 г/л. 7. Реактив Фоля. 8. Раствор яичного белка для цветных реакций.

 

Ход работы

Реагенты Опыт Контроль
Биуретовая реакция
Раствор белка 5 кап -
Вода - 5 кап
NaOH, 10% 5 кап 5 кап
CuSO4, 1% 2 кап 2 кап
Окрашивание    
Нингидриновая реакция
Раствор белка 5 кап -
Вода - 5 кап
Раствор нингидрина 5 кап 5 кап
Кипятить 1-2 мин
Окрашивание    
Ксантопротеиновая реакция
Раствор белка 5 кап -
Вода - 5 кап
HNO3, конц. 5 кап 5 кап
Кипятить до появления окраски раствора белка
Окрашивание    
Реакция Милона
Раствор белка 5 кап -
Вода - 5 кап
Реактив Миллона 3 кап 3 кап
Нагреть до окрашивания осадка белка
Окрашивание    
Реакция Фоля
Раствор белка 5 кап -
Вода - 5 кап
NaOH, 30% 5 кап 5 кап
(CH3COO)2Pb, 5% 1 кап 1 кап
Кипятить до появления черного окрашивания

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Основы биотехнологии

Основы биотехнологии.. витебск министерство образования республики беларусь..

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Практикум

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета
Издание второе, дополненное и исправленное   Витебск Издательство УО «ВГУ им. П.М.Машерова» 2009   УДК 575

Чиркин А.А.
Введение в биотехнологию. Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета / А.А.Чиркин. – Витебск: Издательство УО «ВГУ им. П.М.Машерова», 2009. – 146 с. &nbs

ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ
Для специальности 1-31 01 01 – Биология рекомендуется учебная программа № ТД-G.005/тип., составленная доктором медицинских наук профессором Ю.К.Фомичевым, доктором биологических наук профессором В.

Биотехнологические основы культивирования микроорганизмов.
Обобщенная схема промышленного выращивания микроорганизмов с целью получения конечных продуктов представлена на рис 9. Исходная культура (5-10 мл) ↓ Встряхиваемая к

Работа 4. Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (набор НТК «Анализ-Х») - УИРС
Значение концентрации общего белка в сыворотке крови практически здоровых людей составляют: у взрослых 65-85 г/л, у детей до 6 лет - 56-85 г/л, у новорожденных - 53-89 г/л. Из колориметрических мет

Работа 5. Колоночная гель-фильтрация.
Для гель-фильтрации используются так называемые молекулярные сита - инертные гидратированные полисахаридные материалы, представляющие собой пористые гранулы. Их получают на основе декстрана (сефаде

Работа 6. Определение термолабильности амилазы слюны.
Вариант 1 Реагенты Опыт 1 Опыт 2 Контроль Слюна 1:10, кап. -

Работа 7. Определение оптимума рН для действия амилазы.
Реагенты Значение рН 6,0 6,4 6,8 7,2 7,6 8,0

Работа 8. Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы.
Реагенты Контроль Опыт 1 Опыт 2 Слюна 1:10, мл 1,0 1,0 1,0

Работа 9. Специфичность действия ферментов
Приготовить разведение слюны в 5 раз (1 мл слюны + 4 мл воды) Реагенты Опыт 1 Опыт 2 Опыт 3 Опыт 4

Работа 11. Ингибирующее действие хлорид-ионов на дегидрогеназный комплекс картофеля.
Хлорид-ионы ингибируют дегидрогеназный комплекс и срез картофеля остается без изменений, остальные темнеют. Реактивы, исследуемый материал 1. NaCl, крист. 2. NaI, крист. 3. KClO

Работа 12. Определение активности амилазы крови с помощью метода «сухой химии» в сочетании с рефлометрией.
Под сухой химией понимается процедура, когда реагенты, необходимые для химического анализа, наносятся в определенных пропорциях на бумагу или пленку, высушиваются и стабилизируются. После введения

Работа 13. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу b-глицерофосфата (метод Боданского), УИРС.
Активность щелочной фосфатазы в норме равна 0,5-1,3 ммоль/ч×л, а кислой фосфатазы – 0,06-0,13 ммоль/ч×л. Принцип определения активности фосфатаз основан на способности ферментов отщепля

Работа 14. Качественные реакции на витамин А.
Витамин А при взаимодействии с серной кислотой окрашивается в красно-фиолетовый или красно-бурый цвет, при взаимодействии с хлорным железом - в желто-зеленый цвет. Реактивы, исследуемый ма

Работа 15. Количественное определение витамина А в рыбьем жире.
Принцип метода. Метод основан на реакции витамина А с треххлористой сурьмой в присутствии уксусного ангидрида, в результате чего развивается синяя окраска. Интенсивность окраски, прямо пропо

Работа 16. Качественные реакции на витамин Д.
Витамин Д при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет, при взаимодействии с раствором брома в хлороформе приобретает зеленовато-голубую окраску. Ре

Работа 17. Обнаружение эргостерола в дрожжах.
Эргостерол по строению близок к холестерину и поэтому дают характерную для него реакцию с уксусным ангидридом и серной кислотой (синее или зеленое окрашивание). Реактивы, исследуемый матер

Работа 107. Качественная реакция на витамин Е с азотной кислотой.
Принцип метода.Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет. Реактивы и

Работа 19. Количественное определение витамина Е.
Ход работы В две пробирки наливают по 2,5 мл 0,1% спиртового раствора витамина Е; добавляют по 0,5 мл 70% раствора азотной кислоты и выдерживают в кипящей водяной бане 3 мин. Пробирки охла

Работа 20. Количественное определение витамина С в хвое, шиповнике, картофеле, луке, молоке, капусте по методу Тильманса.
Принцип метода. Количественное определение аскорбиновой кислоты основано на её способности окисляться 2,6-дихлорфенолиндофенолом в дегидроаскорбиновую кислоту. Определение проводится путём т

Работа 22. Выделение фолиевой кислоты из дрожжей и ее обнаружение.
Принцип: фолиевая кислота хорошо растворима в 0,1 н. растворе NaOH. При экстрагировании фолиевой кислоты из дрожжей и ультрафиолетовом облучении наблюдается интенсивно голубая флюоресценция.

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги