Работа 4. Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (набор НТК «Анализ-Х») - УИРС
Работа 4. Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (набор НТК «Анализ-Х») - УИРС - раздел Биотехнологии, ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ Значение Концентрации Общего Белка В Сыворотке Крови Практически Здоровых Люд...
Значение концентрации общего белка в сыворотке крови практически здоровых людей составляют: у взрослых 65-85 г/л, у детей до 6 лет - 56-85 г/л, у новорожденных - 53-89 г/л. Из колориметрических методов количественного определения белка особого внимания заслуживает биуретовый метод, основанный на биуретовой реакции. Принцип: в щелочной среде ионы меди образуют с белками комплексы фиолетового цвета. Интенсивность окрашивания в определенных пределах пропорциональна концентрации белка. Содержание белка устанавливается по интенсивности светопоглощения при 540-560 нм фотометрически. Для расчета количества белка в исследуемом растворе необходимо пользоваться калибровочным графиком, построенным по стандартным растворам белка.
Состав набора
1. Биуретовый реактив (3 флакона по 3,5 г). Приготовление раствора биуретового реактива: содержимое одного флакона растворить в 250 мл дистиллированной воды. Раствор хранится в холодильнике 7 суток.
2. Стандарт белка (раствор или лиофилизат).
3. В лаборатории биуретовый реактив можно приготовить по прописи: растворить 0,15 г CuSO4×5Н2О и 0,6г NaKC4Н4О6×4Н2О (виннокислый натрий-калий, или сегнетова соль) в 50 мл воды при энергичном перемешивании, добавляют 30 мл 10% раствора NaOH и 0,1 г KJ и доводят раствор до объема 100 мл.
Ход работы
В пробирки помещают 0,05 мл сыворотки крови и 2,5 мл биуретового реактива, тщательно перемешивают, избегая образования пены. Через 30 мин измеряют оптическую плотность на КФК в кювете с толщиной слоя 5 мм при длине волны 540-560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы. Холостую пробу ставят также, как опытную, но вместо сыворотки добавляют 0,05 мл физиологического раствора. Расчет ведут по калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой готовят ряд разведений стандартного раствора белка, как указано в таблице:
№
п/п
Стандартный раствор
Белка (мл)
0,9% раствор
хлорида натрия (мл)
Содержание белка (г/л)
0,2
0,3
0,4 ´ А
0,3
0,2
0,6 ´ А
0,4
0,1
0,8 ´ А
Осн. станд. раствор
-
Осн. станд. раствор
А - концентрация стандартного раствора белка, указанная на флаконе.
Из каждого разведения необходимо взять по 0,05 мл о обработать как пробу. Через 30-60 мин измеряют оптическую плотность против холостой пробы. По полученным данным строят калибровочный график. Вычисляют факторы пересчета делением концентраций стандартных растворов на экстинкцию (оптическую плотность). Выводят средний фактор (F). Расчет ведут по формуле: Соп.=Еоп.´F, где Соп – концентрация белка в пробе, F – усредненный фактор. При содержании белка в сыворотке больше 100 г/л, сыворотку разводят физиологическим раствором, а результат умножают на разведение. Этот метод не используют для определения количества белка в моче или спинномозговой жидкости.
Чиркин А.А.
Введение в биотехнологию.
Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета / А.А.Чиркин. – Витебск: Издательство УО «ВГУ им. П.М.Машерова», 2009. – 146 с.
&nbs
ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ
Для специальности 1-31 01 01 – Биология рекомендуется учебная программа № ТД-G.005/тип., составленная доктором медицинских наук профессором Ю.К.Фомичевым, доктором биологических наук профессором В.
Практикум
Работа № 1. Знакомство с питательными среды для культивирования изолированных клеток и тканей растений.
Основные компоненты питательных сред:
- макроэлементы (азот, фосфор, калий,
Работа 5. Колоночная гель-фильтрация.
Для гель-фильтрации используются так называемые молекулярные сита - инертные гидратированные полисахаридные материалы, представляющие собой пористые гранулы. Их получают на основе декстрана (сефаде
Работа 14. Качественные реакции на витамин А.
Витамин А при взаимодействии с серной кислотой окрашивается в красно-фиолетовый или красно-бурый цвет, при взаимодействии с хлорным железом - в желто-зеленый цвет.
Реактивы, исследуемый ма
Работа 15. Количественное определение витамина А в рыбьем жире.
Принцип метода. Метод основан на реакции витамина А с треххлористой сурьмой в присутствии уксусного ангидрида, в результате чего развивается синяя окраска. Интенсивность окраски, прямо пропо
Работа 16. Качественные реакции на витамин Д.
Витамин Д при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет, при взаимодействии с раствором брома в хлороформе приобретает зеленовато-голубую окраску.
Ре
Работа 17. Обнаружение эргостерола в дрожжах.
Эргостерол по строению близок к холестерину и поэтому дают характерную для него реакцию с уксусным ангидридом и серной кислотой (синее или зеленое окрашивание).
Реактивы, исследуемый матер
Работа 19. Количественное определение витамина Е.
Ход работы
В две пробирки наливают по 2,5 мл 0,1% спиртового раствора витамина Е; добавляют по 0,5 мл 70% раствора азотной кислоты и выдерживают в кипящей водяной бане 3 мин. Пробирки охла
Новости и инфо для студентов