рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Работа 5. Колоночная гель-фильтрация.

Работа 5. Колоночная гель-фильтрация. - раздел Биотехнологии, Основы биотехнологии Для Гель-Фильтрации Используются Так Называемые Молекулярные Сита - Инертные ...

Для гель-фильтрации используются так называемые молекулярные сита - инертные гидратированные полисахаридные материалы, представляющие собой пористые гранулы. Их получают на основе декстрана (сефадексы - бактериальный полисахарид), агарозы (из некоторых морских водорослей) или полимеризованных акриламидных гелей (акрилекс).

Принцип метода. Разделительный гель состоит из гранул с определенным размером пор и межгранульного пространства. Молекулы, размер которых превышает размер пор гранул, движутся только в пространстве между гранулами и первыми выходят из колонки. Молекулы, размеры которых меньше размера пор, диффундируют в гранулы и обратно, поэтому их вымывание (элюирование) из колонки замедляется. Чем меньше молекулярная масса вещества, тем требуется больший объем элюирующей жидкости для вымывания его из колонки.

Реактивы, исследуемый материал

1. Раствор хлористого натрия, 8.5 г/л. 2. Гель сефадекса G-200 или 100 (или акрилексы соответствующих марок). 3. Смесь растворов: ненасыщенного раствора голубого декстрана, раствора гемоглобина 200 г/л, насыщенного раствора рибофлавина (1:1:1).

Ход работы

Колонку для разделения веществ заполнить гелем, полученным при гидратировании сефадекса G-200 изотоническим раствором хлористого натрия. Над гелем всегда должен находиться слой изотонического раствора хлористого натрия, чтобы гель не высыхал. На поверхность геля нанести 2-3 капли раствора, представляющего собой смесь трех веществ: голубого декстрана (М.М. 107), рибофлавина (М.М. 3´102) и гемоглобина (М.М. 64,6´103). Раствор для фракционирования должен сначала впитаться гелем, затем в колонку внести 2 раза по 2 мл изотонического раствора хлористого натрия. После этого подключить капельницу с изотоническим раствором хлористого натрия, предназначенным для элюирования разделяемых веществ. При разделении смеси для гель-фильтрации необходимо следить, чтобы в колонке был ток жидкости (т.е. открыт зажим снизу). По мере прохождения через колонку элюирующего раствора смесь разделяется на фракции, окрашенные в различные цвета. Каждую фракцию собрать в отдельную пробирку. В соответствии с относительной молекулярной массой быстрее всего элюируется декстран (голубой), а затем гемоглобин (красный) и рибофлавин (желтый). После элюирования смеси колонку необходимо промыть изотоническим раствором хлористого натрия до тех пор, пока гель станет бесцветным, затем закрыть и оставить небольшой слой раствора над гелем. Только в таком состоянии колонку можно использовать для работы повторно.

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Основы биотехнологии

Основы биотехнологии.. витебск министерство образования республики беларусь..

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Работа 5. Колоночная гель-фильтрация.

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета
Издание второе, дополненное и исправленное   Витебск Издательство УО «ВГУ им. П.М.Машерова» 2009   УДК 575

Чиркин А.А.
Введение в биотехнологию. Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета / А.А.Чиркин. – Витебск: Издательство УО «ВГУ им. П.М.Машерова», 2009. – 146 с. &nbs

ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ
Для специальности 1-31 01 01 – Биология рекомендуется учебная программа № ТД-G.005/тип., составленная доктором медицинских наук профессором Ю.К.Фомичевым, доктором биологических наук профессором В.

Биотехнологические основы культивирования микроорганизмов.
Обобщенная схема промышленного выращивания микроорганизмов с целью получения конечных продуктов представлена на рис 9. Исходная культура (5-10 мл) ↓ Встряхиваемая к

Практикум
Работа № 1. Знакомство с питательными среды для культивирования изолированных клеток и тканей растений. Основные компоненты питательных сред: - макроэлементы (азот, фосфор, калий,

Работа 4. Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (набор НТК «Анализ-Х») - УИРС
Значение концентрации общего белка в сыворотке крови практически здоровых людей составляют: у взрослых 65-85 г/л, у детей до 6 лет - 56-85 г/л, у новорожденных - 53-89 г/л. Из колориметрических мет

Работа 6. Определение термолабильности амилазы слюны.
Вариант 1 Реагенты Опыт 1 Опыт 2 Контроль Слюна 1:10, кап. -

Работа 7. Определение оптимума рН для действия амилазы.
Реагенты Значение рН 6,0 6,4 6,8 7,2 7,6 8,0

Работа 8. Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы.
Реагенты Контроль Опыт 1 Опыт 2 Слюна 1:10, мл 1,0 1,0 1,0

Работа 9. Специфичность действия ферментов
Приготовить разведение слюны в 5 раз (1 мл слюны + 4 мл воды) Реагенты Опыт 1 Опыт 2 Опыт 3 Опыт 4

Работа 11. Ингибирующее действие хлорид-ионов на дегидрогеназный комплекс картофеля.
Хлорид-ионы ингибируют дегидрогеназный комплекс и срез картофеля остается без изменений, остальные темнеют. Реактивы, исследуемый материал 1. NaCl, крист. 2. NaI, крист. 3. KClO

Работа 12. Определение активности амилазы крови с помощью метода «сухой химии» в сочетании с рефлометрией.
Под сухой химией понимается процедура, когда реагенты, необходимые для химического анализа, наносятся в определенных пропорциях на бумагу или пленку, высушиваются и стабилизируются. После введения

Работа 13. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу b-глицерофосфата (метод Боданского), УИРС.
Активность щелочной фосфатазы в норме равна 0,5-1,3 ммоль/ч×л, а кислой фосфатазы – 0,06-0,13 ммоль/ч×л. Принцип определения активности фосфатаз основан на способности ферментов отщепля

Работа 14. Качественные реакции на витамин А.
Витамин А при взаимодействии с серной кислотой окрашивается в красно-фиолетовый или красно-бурый цвет, при взаимодействии с хлорным железом - в желто-зеленый цвет. Реактивы, исследуемый ма

Работа 15. Количественное определение витамина А в рыбьем жире.
Принцип метода. Метод основан на реакции витамина А с треххлористой сурьмой в присутствии уксусного ангидрида, в результате чего развивается синяя окраска. Интенсивность окраски, прямо пропо

Работа 16. Качественные реакции на витамин Д.
Витамин Д при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет, при взаимодействии с раствором брома в хлороформе приобретает зеленовато-голубую окраску. Ре

Работа 17. Обнаружение эргостерола в дрожжах.
Эргостерол по строению близок к холестерину и поэтому дают характерную для него реакцию с уксусным ангидридом и серной кислотой (синее или зеленое окрашивание). Реактивы, исследуемый матер

Работа 107. Качественная реакция на витамин Е с азотной кислотой.
Принцип метода.Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет. Реактивы и

Работа 19. Количественное определение витамина Е.
Ход работы В две пробирки наливают по 2,5 мл 0,1% спиртового раствора витамина Е; добавляют по 0,5 мл 70% раствора азотной кислоты и выдерживают в кипящей водяной бане 3 мин. Пробирки охла

Работа 20. Количественное определение витамина С в хвое, шиповнике, картофеле, луке, молоке, капусте по методу Тильманса.
Принцип метода. Количественное определение аскорбиновой кислоты основано на её способности окисляться 2,6-дихлорфенолиндофенолом в дегидроаскорбиновую кислоту. Определение проводится путём т

Работа 22. Выделение фолиевой кислоты из дрожжей и ее обнаружение.
Принцип: фолиевая кислота хорошо растворима в 0,1 н. растворе NaOH. При экстрагировании фолиевой кислоты из дрожжей и ультрафиолетовом облучении наблюдается интенсивно голубая флюоресценция.

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги