Основные этапы ДНК-диагностики. - раздел Биология, Генетика, Наследственность, Изменчивость 1. Получение Образцов Днк (Или Рнк) Реализуется В Двух Вариантах:
А)...
1. Получение образцов ДНК (или РНК) реализуется в двух вариантах:
а) выделение всей ДНК (тотальной или геномной) из клеток:
б) накопление определенных фрагментов с помощью ПЦР.
Источником геномной ДНК являются любые ядросодержащие клетки. Выделенная из клеток ДНК представляет собой весь геном организма, поэтому такие образцы называют геномной ДНК. Материалом для исследования является периферическая кровь (лейкоциты), хорион, амниотические клетки, культура фиброб-ластов. эпителий слизистой щеки, волосяные луковицы и др. Для диагностики болезни или гетерозиготного состояния достаточно исследовать лишь небольшой фрагмент генома. поэтому для проведения анализа необходимо получить достаточное количество таких фрагментов, т.е. амплифицировать (умножить) их. Накопление нужных фрагментов ДНК решается с помощью ПЦР.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - метод амплификации ДНК т уйго. В течение нескольких часов можно размножить определенную последовательность ДНК в количестве, превышающем исходное в миллион и более раз. Необходимым условием для проведения ПЦР является знание нукледотидной последовательности амгашфицируемого фрагмента. В соответствии с нуклеотидной последовательностью концов исследуемого участка синтезируется два олигонуклеотидных прай-мера (затравки). Длина праймеров составляет 20-30 пар нуклеотидов. Процесс амплификации осуществляется в виде нескольких повторяющихся циклов. Каждый цикл включает три стадии: температурная денатурация ДНК. присоединение праймеров к комплементарным последовательностям одноцепочечных молекул (отжиг), синтез полинуклеотидных цепей на одноцепочечных молекулах в границах присоединенных праймеров с помощью полимеразы.
2. Рестрикция ДНК на фрагменты. Этот процесс осуществляется ресрикта-зами (они относятся к бактериальным эндонуклеазам). Они разрывают двухцепо-чечную ДНК в пределах строго определенных для каждого фрагмента последовательностей нуклеотидов протяженностью 4-6 пар нуклеотидов.
3. Электрофорез фрагментов ДНК обеспечивает разделение этих фрагментов при их распределении на поверхности агарозного или полиакриламидного геля. Фрагменты ДНК движутся в геле, помещенном в электрическое поле, от отрицательного полюса к положительному. После окончания электрофореза каждый фрагмент ДНК занимает определенное положение в виде дискретной полосы в конкретном месте геля. Длину каждого фрагмента определяют путем сравнения пройденного фрагментом расстояния с расстоянием, пройденным стандартным образцом ДНК с известными размерами
4. Визуализация и идентификация фрагментов ДНК. После окончания ПЦР гель обрабатывается этидия бромидом, который связывается с ДНК. при ультрафи- олетовом облучении поверхности геля выявляется свечение в красной области спектра. Разработаны и другие методы окраски ПЦР-фрагментов. Идентификация специфических фрагментов ДНК осуществляется с помощью блот-гибридизации по Саузерну. Проводят гибридизацию фрагментов ДНК (которые фиксируют на специальном фильтре) со специфическим по нуклеотидной последовательности меченым радионуклидом или флюоресцентной метши олигонуклеотидным синтетическим зондом или клонированным фрагментом ДНК. Нуклеотидная последовательность зонда должна быть полностью или частично комплементарна изучаемо-ш участку геномной ДНК. Радиоактивно меченные участки выявляют путем экспонирования фильтра с рентгеновской пленкой (ауторадиография). После проявления на пленке видны полосы меченной зондом ДНК. Нерадиоактивные метки визуализируют с помощью флюоресценции или опосредованно с помощью антител. Различают прямую и косвенную ДНК-диагностику генных наследственных болезней.
Прямые методы возможны при условии, что ген -заболевания клонирован, известна его экзон интронная организация или нуклеотидная последовательность комплементарной ДНК. При прямой диагностике предметом анализа является мутация гена. Косвенные методы диагностики применяются, если ген заболевания не клонирован или заболевание генетически гетерогенное. Этот метод основан на использовании сцепленных с геном полиморфных маркеров. В этом случае определяется гашютип хромосомы, несущей мутантный ген в семьях высокого риска, т.е. у родителей больного и его ближайших родственников. Такой подход возможен практически для всех генных заболеваний с известной локализацией гена.
Генетика от гречес Сепеисоз относящийся к происхождению наряду с морфологией физиологией и биохимией является теоретическим фундамен том... Наследственность свойство организмов обеспечивать материальную и... Изменчивость это свойство организмов изменять наследственные задатки приобретать новые свойства или утрачивать...
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ:
Основные этапы ДНК-диагностики.
Что будем делать с полученным материалом:
Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
Изменчивость наследственного материала
Под этим определением понимается способность к изменению наследственного материала под действием различных причин. Изменчивость всегда сопутствует наследственному материалу, несмотря на наличие в
Синдром Марфана
С. Марфана (или Марфана-Ашара) относят к наследственным болезням соединительной ткани, при котором нарушается синтез коллагена и эластина из-за повреждения гена 15 хромосомы, отвечающего за проду
ХРОМОСОМНЫЕ БОЛЕЗНИ
Хромосомные болезни- большая группа врожденных наследственных болезней, характеризующихся множественными пороками развития и являющихся следствием хромосомного дисбаланса во всех
Синдром Эдвардса - трисомия 18
Почти во всех случаях синдром Эдвардса обусловлен простой трисомией (га-метическая мутация у одного из родителей), реже встречаются мозаичные формы (нерасхождение на ранних стадиях дробления, транс
Синдром Патау - трисомия 13
Частота 1:5000 - 1:7000 новорожденных. М1:Ж1. Цитогенетически выделяют 3 (]юрмы: трисомная (75%). транслокационная (20%), мозаичная (5%). Дети с синдромом Патау рождаются с истинной прената
Синдром Клайнфельтера
(полисемия по Х-хромосоме)
Частота - 1:500 новорожденных мальчиков.
Цитогенетические варианты:
подавляющее большинство больных имеют кариотип - 47. ХХУ.
Синдром трисомии X
Частота 1:1000 новорожденных девочек. Кариотип: 41.XXX. реже полисемии -48.ХХХХ.49.ХХХХХ. В 75% случаев у больных отмечается снижение интеллекта. Каких-либо выраженных дизморфий и нарушения
ВРОЖДЕННЫЕ АНОМАЛИИ РАЗВИТИЯ
Раздел клинической генетики, изучающий этиологию, патогенез, клинические проявления, методы диагностики, лечения, профилактики врожденных пороков развития получил название тератология.
Мониторинг ВПР
Среди профилактических программ существенное место занимает мониторинг врожденных пороков развития. Основная цель Программы мониторинга ВПР состоит в обнаружении изменений в частотах ВПР, что може
Акроцефалосиндактилия
Группа синдромов множественных пороков, основными компонентами которых являются акроцефалия («башенный» череп), возникающий вследствии крани-осиностоза и синдактилия.
Синдром Алера (акроц
Синдром Дубовица.
Тип наследования - аутосомно-доминантный. Минимальные признаки: прена-тальная и постнатальная задержка физического и умственного развития, микроцефалия необычное лицо, экзематозные поражения кожи.
БОЛЕЗНИ С НАСЛЕДСТВЕННЫМ ПРЕДРАСПОЛОЖЕНИЕМ
Рассмотренные в предыдущих разделах генные и хромосомные болезни полностью определяются патологической наследственностью, т. е. мутациями. Вместе с тем известен широкий крут заболеваний, таких как
ДИАГНОСТИКА НАСЛЕДСТВЕННОЙ ПАТОЛОГИИ
Генеалогическийметод
Относится к числу основных в генетике человека и опирается на генеалогию -учения о родословных. Суть метода заключается в составлении родословной и по
Биохимические методы
Биохимические методы применяются в лабораторной диагностике наследственных болезней с начала XX века. Биохимические показатели отражают сущность бо-лечни более адекватно, чем клинические симптомы,
Неинвазивные методы.
В данном случае речь идет о методе обследования плода без оперативного вмешательства. В настоящее время к ним относятся фактически только УЗИ. Ультразвуковое исследование проводится тр
Инвазивные методы
Показания к инвазивной ПД являются:
- структурные перестройки хромосом у супругов (у одного из супругов).
- гетерозиготное носигельство. патологичского гена у обоих родителей при
ОРГАНИЗАЦИЯ МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ СЛУЖБЫ
Согласно приказу Минздрава РФ от 30.12.93 № 316. медико-генетическая служба в России объединяет 85 медико-генетических центров, консультаций и кабинетов, где работают более 300 врачей-генетиков и в
Медико-генетическое консультирование
Это специализированный вид медицинской помощи. Наиболее распространенный вид профилактики наследственных болезней Суть МГК - определение прогноза рождения ребенка с наследственной патологией. В Р
Симптоматическое лечение
В настоящее время симптоматическое лечение для большинства наследственных форм является единственно возможным. Классическим примером такого вида лечения является терапия лгуковисцидоза При наличии
Патогенетическое лечение
Благодаря знаниям молекулярной и биохимической генетики появляются новые возможности изучения патогенеза каждого заболевания, а соответственно и разработки новых методов патогенетической терапии.
Этиологическое лечение
Этот вид лечения наиболее перспективен, так как полностью устраняет причину заболевания, а соответственно и полностью излечивает его.
Сложности этиологического лечения наследственных боле
Хирургическое лечение
Этот вид лечения занимает существенное место в помощи больным с наследственной патологией. Зачастую необходимость в хирургической коррекции возникает непосредственно сразу после рождения ребенка
Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Новости и инфо для студентов