Методы диагностики и профилактики микробной контаминации при трансплантации эмбрионов

Содержание Введение 1. Обзор литературы 1.1 Состояние и перспективы применения метода трансплантации эмбрионов 1.2 Чувствительность матки к инфекциям в разные периоды полового цикла 1.3 Предупреждение заноса инфекции в матку при извлечении и пересадке эмбрионов 1.4 Влияние микроорганизмов на спермии, яйцеклетки и эмбрионы 1.5 Влияние антибиотиков на спермии, яйцеклетки, эмбрионы 2. Собственные исследования 2.1 Цель и задачи 2.2 Материалы и методика исследований 2.1 Подготовка лаборатории, посуды и инструментов для манипулирования с эмбрионами 2.2 Подготовка доноров и реципиентов 2.3 Извлечение и подготовка эмбрионов к пересадке 2.4 Влияние микробного фактора на приживляемость эмбрионов 2.3 Анализ экономической деятельности предприятия 2.4 Характеристика предприятия 2.5 Результаты исследований 5.1 Разработка мер предупреждения микробной контаминации эмбрионов на технологических этапах их подготовки 5.2 Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий 2.6 Обсуждение результатов собственных исследований 3. Охрана труда 3.1 Организация охраны труда 3.2 Производственная санитария 3.3 Пожарная безопасность Выводы и предложения Выводы Предложения производству Список литературы Введение Современные темпы развития животноводства требуют совершенствования существующих методов селекционной работы с целью создания и ускоренного размножения высокопродуктивных животных А.П.Студенцов и др. 2000 . Более интенсивное использование репродуктивного потенциала ценных в племенном отношении женских особей возможно при трансплантации эмбрионов.

Одним из главных условий успешного применения метода трансплантации эмбрионов в животноводстве является асептичность проводимых операций A. Brand et al 1978 H. Kupferschmid 1984 E. Singh, 1985 А.Овчинников, 1985 Ф.И.Осташко и соавт 1986 . В технологии трансплантации эмбрионов важное место отводится разработке методов, предупреждающих возможность контаминации их патогенной микрофлорой, которые обеспечивают получение здоровых телят и профилактируют появление гинекологических болезней, в частности, эндометритов как у коров - доноров, так и у реципиентов.

При манипулировании с эмбрионами вне организма нельзя допускать их инфицирования и переноса микроорганизмов в матку реципиента M. Tibier, I. Atwell, 1987 . Бактериальному загрязнению эмбрионы подвергнуты и при их оценке.

Многие авторы утверждают, что как яйцеклетка, так и эмбрион с интактной зоной пеллюцида надежно защищены от микробного фактора, тем не менее, некоторые из них рекомендуют многократное отмывание эмбрионов в стерильных буферных средах или в средах с добавлением ферментов R.A.Bowen et al 1983 E. Singh et al 1982 1983 W. Hare et al 1984 . Именно поэтому руководством международного общества по пересадке эмбрионов Manual of the international embryo transfer, 1986 предусмотрен санитарный контроль их качества.

В нашей стране и за рубежом ведутся интенсивные работы по разработке оптимальных способов трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота.

Продолжаются исследования по совершенствованию гигиенических и технических приемов получения и пересадки эмбрионов.

Анализ литературных данных показал целесообразность исследований по совершенствованию гигиенических приемов при трансплантации эмбрионов.

Это продиктовано недостаточным количеством противоречивых данных о влиянии микроорганизмов на приживлямость эмбрионов. Существует мнение, что внесение инфекции в матку с пистолетом Кассу не является причиной яловости, если в остальном соблюдена асептика A. Brand, 1976 A. Trounson, 1978 . Однако, в качестве дополнительной предосторожности от возможности внесения влагалищной инфекции в матку реципиента кембриджские сотрудники покрывали наконечник пистолета пластиковым чехлом.

Другие исследования А.Бранда показали, что даже в случае отрицательной бактериологической пробы инструмента после нехирургической трансплантации эмбрионов может произойти вирусное заражение в ходе ее осуществления A. Brand, 1978 . Оно может быть причиной последующих осложнений, в частности, эндометритов. А у коров-доноров, больных эндометритом, наблюдали частичную или полную дегенерацию эмбрионов на разных стадиях их развития, при значительном числе неоплодотворенных яйцеклеток А.Д.Бугров и соавт 1988 . Поэтому стало необходимым более детально изучить вопросы бактериальной контаминации половых путей коров и телок при манипуляциях извлечения и пересадки эмбрионов, влияние ее на их приживляемость, с одной стороны, и найти эффективные антимикробные средства, с другой стороны.

Целью нашей работы была разработка методов профилактики и санитарного контроля технологических процессов при трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота.

Для достижения этой цели нами поставлены на разрешение следующие задачи 1. Изучить бактериальную контаминацию половых путей телок-реципиентов в фолликулярную и лютеальную фазы полового цикла. 2. Изучить влияние антибактериальных препаратов на микрофлору половых путей после их санации непосредственно перед извлечением и пересадкой эмбрионов. 3. Провести сравнительную оценку антибактериальных препаратов для санации половых путей. 4. Испытать антибиотики для санации промывных буферных сред и отмывки эмбрионов. 5. Изучить влияние испытанных нами антибактериальных препаратов на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов. 1.

Обзор литературы

Обзор литературы 1.1

Состояние и перспективы применения метода трансплантации эмбрионов

Koinig 1980 , а также сравнительно высокой трудоемкостью и стоимостью ... В настоящее время наиболее эффективен нехирургический метод трансплант... В последние годы в ряде стран изучают вопрос о возможности переноса за... Singh et al 1983 Z. Несмотря на достигнутые успехи в разработке приемов вызывания множеств...

Чувствительность матки к инфекциям в разные периоды полового цикла

Pyogenes. А.В.Квасницкий 1988 в своей книге цитирует результаты экспер... В период течки под воздействием эстрогенов происходит активация как сп... 1971 , подтвердили наличие в эстральной матке высокоэффективного защит... Авдосьева I.К. 3.3 .

Предупреждение заноса инфекции в матку при извлечении и пересадке эмбрионов

Krolinski, 1977 . 1974 - 32 вида микробов и 13 видов плесени. Р С.Р.Косарев с сотрудниками 1984 испытали 15 антимикробных препаратов... Из пенициллинов в комбинации с гентамицином лучше всего сочетается амп... Недостаточное количество противоречивых данных о влиянии микроорганизм...

Собственные исследования

Собственные исследования 2.1

Цель и задачи

Целью нашей работы была разработка методов профилактики и санитарного ... Цель и задачи. 4. 2.2 . 2.

Материалы и методика исследований

активных спермиев рис.1 . Рис.1. Патологические формы спермиев Для бактериологических исследований испо... 2.2.1 Подготовка лаборатории, посуды и инструментов для манипулировани... стерилизовали в боксе путем их облучения бактерицидными лампами БУФ30 ...

Подготовка доноров и реципиентов

Подготовку донора начинали в манеже с чистки и мытья кожного покрова и... Кожу наружных половых органов и половые пути преддверие влагалища, вла... 4.2.3 . Через 15 минут после санации половых путей проводили извлечение эмбрио... При этом йод растворяется в йодистом калии. Раствор переливали в больш...

Извлечение и подготовка эмбрионов к пересадке

при температуре 37 С в термостате. Надосадочную жидкость аспирировали с помощью сифона. Поиск зародышей производили под стереоскопическим микроскопом МБС-9. Жизнеспособность эмбрионов определяли по общепринятой методике оценки ... aureus, другим 10 - эмбрионы с внесенной культурой E.coli, 20 контроль...

Анализ экономической деятельности предприятия

Чел. На данный показатель существенно повлияло увеличение оказания услуг по... грн Укрзооветпромпостач 80 58 Биолек 10 7,25 Харьковский мясокомбинат ... Заработная плата с отчислениями 119,9 14,8 158,4 17,4 186,1 20,1 Подде... Основными статьями сметы - содержание основных средств 38,5 , материал...

Характеристика предприятия

Характеристика предприятия. Харьковский биотехнологический центр расположен на восточной окраине г... В центре имеются административный и лабораторный корпус, в котором нах... Центр выполняет задания Академии аграрных наук Украины, Министерства а... Собственных земельных угодий ХБТЦ не имеет.

Разработка мер предупреждения микробной контаминации эмбрионов на технологических этапах их подготовки

отобранные из промывных буферных сред и сред из чашек после отмывки эм... coli 4 6 4 5 Гентамицин 12 Ампициллин 100 B. subtilis Ps. 4 . Уф оп 9180,48 2108,24 11288,72 грн.

Обсуждение результатов собственных исследований

Как известно, низкий уровень воспроизводства у самок и длительный инте... В своей работе мы испытали три комплекса антибиотиков гентамицин с амп... Концентрация гентамицина 4, 6 и 10 мкг мл хотя и подавляла в комплексе... Добавление антибиотиков в промывные буферные среды является хорошим ан... Существенным качественным параметром развития эмбриона в культуре явля...

Охрана труда

Охрана труда 5.1

Организация охраны труда

Организация охраны труда. 4 апреля 1994 года приказом государственного комитета Украины по надзо... В хозяйстве проводится вводный инструктаж, первичный инструктаж на раб... Фактические затраты на охрану труда в 1999-2001 годах выше планируемых... Финансирование мероприятий по охране труда происходит за счет собствен...

Производственная санитария

Генеральные планы сельскохозяйственных предприятий и СНиПа 2.09.04 87. Общие санитарно-гигиенические требования. СНиП 2.04.04-86. Отопление, вентиляция и кондиционирование воздуха. Нормы проектировани... СНиП II4-79. Нормы проектирования.

Выводы и предложения1. Улучшить финансирование охраны труда по инструктажу. 2. Четкий контроль за соблюдением охраны труда. 3. Привлечение к строгой ответственности за нарушение охраны труда, в плоть до увольнения с занимаемой должности Законодавство України про Охорону праці. Збірник нормативних документів. В 4х томах К 1997 6. Выводы 1. Бактериальная контаминация половых путей телок-реципиентов снижается в фолликулярную фазу и возрастает в лютеальную фазу полового цикла в момент пересадки эмбрионов. 2. Микрофлора половых путей Stahp.aureus и E.coli оказывает отрицательное влияние на приживляемость эмбрионов при трансплантации их телкам-реципиентам. 3. Добавление в промывные буферные среды комплекса антибиотиков гентамицин 12 мкг мл с ампициллином 100 Ед мл снижает микробную контаминацию эмбрионов, профилактирует занос инфекции в матку реципиента, а также заболевания коров-доноров эндометритами. 4. Многократная отмывка эмбрионов средой Дюльбекко с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин с ампициллином в концентрации 12 мкг мл и 100 Ед мл, соответственно, обеспечивает полную деконтаминацию эмбрионов и повышает их приживляемость на 25 . Предложения производству1. Комплекс антибиотиков гентамицин в концентрации 12 мкг мл с ампициллином 100 Ед мл рекомендуется добавлять в промывные буферные среды и в среды для отмывки эмбрионов. 2. Бактериологический контроль смывов из матки рекомендуется проводить раз в год у каждого донора для определения бактериальной загрязненности при вымывании эмбрионов на пунктах трансплантации.

Список литературы 1. БалашовН.Г.Определение безвредности, эффективности и порядок испытания препаратов для разбавления и санации спермы.

Справочник.

Ветеринарные препараты М 1981 с.419 - 427, 435 - 438. 2. БеликовА.А.Институт животноводства УААН Микробная контаминация спермы хряков Повышение эффективности ведения свиноводства Быково, 1999 С.200-203 - 1999 3. БиргерИ.О.Методика определения антагонизма микробов Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования М Медицина 1973 с.121-125. 4. БугровА.Д ВеличкоИ.М ТеличкаТ.А. Влияние антибиотиков на жизнеспособность эмбрионов.

Тезисы докладов II Республиканской научно-производственной конференции Львов 1988 с.11-12. 5. БугровА.Д ВеличкоИ.М. Микробная контаминация при трансплантации эмбрионов.

Тезисы докладов симпозиума по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота Тарту. -1986 с.38. 6. ГолубеваЕ.Д.Применение пенициллина и стрептомицина при бактериальной загрязненности спермы и влияния их на переживаемость спермиев Плем. работа и повышение продуктивности в животноводстве. Минск 1965 с.49-53. 7. ЖильцовН.З МадисонВ.В.Трансплантация эмбрионов в молочном скотоводстве Животноводство 1986 6 с. 64. 8. ЗавертяевБ.П. Значение многоплодия в скотоводстве М. Россельиздат 1987 с.6-15. 9. ЗавертяевБ.П. Биотехнология в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота Л. Агропромиздат 1989. 10. ЗавирюхаВ.И ХоминС.П ШаловилоС.Г ГамотаА.А. Профилактика субклинических эндометритов у коров-доноров.

Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции Львов. -1987 с.28. 11. ЗацепиловаТ.А КудринА.Н. Влияние лекарственных веществ на оплодотворенную яйцеклетку и эмбрион Фармация 1983 4 с.48. 12. ЗвереваГ.В ХоминС.П ЗавирюхаВ.И ШаловилоС.Г ГамотаА.А.Ветеринарные аспекты трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции Львов 1987 с.30-31. 13. Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота М Госагропром СССР 1987. 14. КачмарО.М. Авдосьева I.К. УрусР.В. Виявлення мiкоплазм в спермi бугаiв-плiдникiв Информ.бюл. Укр.акад. аграр. наук. Инт эксперим. клинич. вет. медицины, 1994 С.250-1994 15. КвасницкийА.В.Опыт межпородной пересадки яйцеклеток.

Советская зоотехния 1951 19 с.50-52. 16. КвасницкийА. В МартыненкоН.А БлизнюченкоА.Г. Трансплантация эмбрионов и генная инженерия в животноводстве Киев. Урожай. -1988. 17. КлинскийЮ СергеевН Шихов И. Теленок из замораживанного эмбриона Животноводство 1980 7 с.35 18. КовалевВ.Ф ВолковИ.Б ВиолинБ.В. и соавт.

Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны Справочник М. ВО Агропромиздат 1988 с.40-41. 19. КозловскийЕ. В ЕмельяненкоП.А.Микрофлора тела с.х. животных. Ветеринарная микробиология М Колос . -1982 с.53-56. 20. КорниенкоП.Ф ТрефиловА.А ШохорЗ.И БелоглазовП.Г. Справочник по аппаратуре, приборам, инструментам и лабораторному оборудованию Киев. Урожай 1987. 21. КондратовБ.Д.Псевдомонойрсительство у быков-производителей Молочное и мясное скотоводство 1976 2 с.29. 22. КосаревС. Р.Влияние бактерицидных веществ на выживаемость спермиев хряков.

Сб. науч. трудов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов М 1984 с.221-240. 23. КосаревС.Р.Действие антибиотиков и золотистого стафилококка на спермиев хряков Актуал. пробл. ветеринарии Барнаул, 1995 С.184-1995 24. КузнецоваС.М.Комбинированная антибиотикотерапия бактериальных инфекций Антибиотики 1983 28 12 с.19-37. 25. КудрявцевИ.В ГолубевА.К. Перспективы использования методов биотехнологии в животноводстве Успехи современной генетики.

М. Наука 1985 13 с.21. 26. ЛакинГ.Ф.Статистические характеристики при альтернативной группировке вариант. Биометрия М. Высшая школа 1990 с.64-65. 27. ЛогвиновД. Д.Асептическое взятие спермы у быков.

Ветеринария 1972 5 с.86-89. 28. ЛогвиновД.Д. Профилактика микробного и грибкового загрязнения спермы быков Труды Харьковского зооветинститута 1970 5 29 - с.167-172. 29. ЛогвиновД.Д ПлугаревВ.П ХатураГ.Г МиллерА.Г. Санитарная оценка методов ведения спермы быков коровам и телкам. Тезисы докладов республиканской научной конференции Харьков 1988 с.25-26. 30. МартыненкоН.А. Эмбриональная смертность с-х. животных и ее предупреждение Киев. Урожай 1971 с.16-17, 238-256. 31. МадисонВ.В МадисонВ.Л.Ветеринарный контроль при пересадках эмбрионов и борьба с инфекционными болезнями.

Трансплантация эмбрионов в практике разведения молочного скота М. Агропромиздат 1988 с.18-25. 32. МадисонВ.Л МадисонВ. В. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота Животноводство 1985 П с.60-61. 33. МихайловН.Н.Значение инфекционных факторов в этиологии бесплодия с-х. животных. Воспроизводство и профилактика бесплодия с-х. животных М 1976 с.65-74. 34. МозговИ.Е.Антибиотики Фармакология М. Колос 1974 с.383-410. 35. МуромцевГ.С БутенкоР.Г ТихоненкоТ.И Прокофьев М.И. Трансплантация эмбрионов и клеточная инженерия в животноводстве Основы сельскохозяйственной биологии М - .1990 с 236-300. 36. МюйрсеппИ.Я ЯакмаЮ.Р. Влияние состояния эндометрия коров-доноров эмбрионов на количество, качество и приживляемость эмбрионов Тезисы докладов научно-практической конференции Львов 1988 с.21. 37. НеждановА.Г ЧеремисиновГ.А КовальчукА. А.Значение йода и сроков осеменения в профилактике бесплодия с-х. животных М. Колос 1976 с.106. 38. НовохатскийА.С ГерасимоваС.С. Исследования противовирусного действия гентамицина Антибиотики 1975 т. 20 5 с.428-433. 39. ОсидзеД.Ф.Стимулирующие и лечебные препараты, кормовые добавки Справочник ветеринарные препараты М. Колос 1981 с.350-414. 40. ОсташкоФ.И ВеличкоИ.М Иванов B.C. Микробный фактор, как одна из причин изменяемости результатов искусственного осеменения крупного рогатого скота Физиология воспроизведения сельскохозяйственных животных Советско-американский семинар Харьков 1977 с.257-261. 41. ОсташкоФ.И. Насущие вопросы искусственного осеменения крупного рогатого скота Тезисы докладов научно-практической конференции по теории и практике воспроизводства с-х. животных Харьков 1972 - с.16-18.