РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ по дисциплине ОСНОВЫ МИКРОБИОЛОГИИ

Министерство сельского хозяйства РФ

ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

 

Феоктистова Н.А., Васильев Д.А.

РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

по дисциплине

«ОСНОВЫ МИКРОБИОЛОГИИ»

Часть 1

специальность: 080401.65

«Товароведение и экспертиза товаров»

 

Ульяновск 2008

 

УДК 620.2

ББК 30.609

«Руководство к практическим занятиям» предназначено для освоения программы по дисциплине «Основы микробиологии» специальности 080401.65…    

Техника безопасности в бактериологической лаборатории.

Устройство микроскопа. Особенности микроскопии в микробиологической практике (иммерсионная система).

Формы микроорганизмов.

Цель занятия. Усвоить правила работы в бактериологической лаборатории. Ознакомиться с техникой безопасности и личной профилактикой. Освоить работу с… Материалы и оборудование. Микроскопы, окрашенные микроскопические препараты с… Методические указания. После краткого объяснения преподавателя о порядке проведения работы в лаборатории,…

Правила работы в лаборатории

2. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, продукты. 3. В помещении лаборатории категорически запрещается есть. 4. Перед началом работы обязательно проверяют наличие и исправность приборов, посуды, горелок и др. О замеченных…

Уборка лабораторного помещения

Помещение лаборатории ежедневно до работы убирают влажным способом. Пыль с поверхностей протирают увлажнённой тряпкой смоченной дезинфицирующим раствором. После окончания работы стены, покрытые метлахскими плитками или окрашенные масляной краской, моют горячей водой с мылом или стиральным порошком. Полы моют 3-5% раствором дезинфектанта. Потолки, карнизы, верхняя часть стен, окрашенные клеевой краской, не реже одного раза в неделю очищают от пыли пылесосом.

 

Подготовка бокса к работе

 

Устройство биологического микроскопа

Микроскоп - сложный оптический прибор, используемый для изучения морфологии и тинкториальных свойств микроорганизмов. Принципиально все микроскопы… Механическую часть составляют: - основание микроскопа,

Работа с иммерсионной системой

Объективы среднего увеличения (´20, ´40) применяют для изучения крупных клеток микроорганизмов (например грибов). Эти объективы… Объективы больших увеличений (´85, ´90) носят название…  

Морфология бактерий

Для различных видов кокков характерно своеобразное расположение клеток, обусловленное способом деления. Микрококки - беспорядочно расположенные кокки, в диаметре не превышают 0,5… Диплококки - кокки, располагающиеся попарно, делятся в одной плоскости.

Задание для выполнения на занятии

1. Записать в тетради правила работы в лаборатории.

2. Законспектировать раздел «Устройство биологического микроскопа» и схематично зарисовать в рабочей тетради биологический микроскоп.

3. Законспектировать раздел «Работа с иммерсионной системой».

4. Зарисовать в рабочей тетради основные формы бактерий.

5. Зарисовать в рабочей тетради основные виды посуды для микробиологических исследований: чашки Петри, плоские бутыли-матрацы, пробирки и колбы с поплавками, колбы конические Эрленмейера, колбы кругло- и плоскодонные, пипетки Мора, пастеровские пипетки, пробирки биологические (без ранта).

 

Контрольные вопросы

1. Каковы правила работы в бактериологической лаборатории?

2. Опишите методику подготовки к работе микробиологического бокса.

3. Каково устройство светового микроскопа?

4. Опишите работу с иммерсионной системой.

5. Какова морфология бактерий?

 

Домашнее задание

1. Изучить назначение следующих аппаратов и приборов: термостата, автоклава, сушильного шкафа, центрифуги, лабораторного рН-метра.

2. Подробно изучить и записать в тетради назначение основных составляющих механической и оптической частей биологического микроскопа.

3. Изучить состав и назначение микробиологических питательных сред, порядок приготовления и стерилизации питательных сред. Составить конспект в рабочей тетради.

 

Лабораторно-практическое занятие № 2

Методы работы с микроорганизмами

Цель занятия. Овладеть методикой приготовления мазка-препарата для микроскопии из микробной взвеси. Ознакомиться с методами приготовления красящих… Материалы и оборудование. Набор красок, спирт ректификат 96,6%,… Методические указания. После объяснений преподавателя студенты конспектируют материал занятия и осваивают…

Техника приготовления мазков

Мазки готовят из культур микробов, патологического материала (мокрота, гной, моча, кровь и др.) и из органов трупов. Приготовление препарата для микроскопии складывается из следующих этапов: 1.Приготовление мазка на обезжиренном предметном стекле.

Высушивание и фиксирование мазков

Физический способ фиксации. Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или 1 и II пальцами правой руки за ребра мазком кверху и плавным движением… Химический способ фиксации. Для фиксации мазков применяют химические вещества… Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом и затем высушивают на воздухе.

Краски, применяемые в микробиологической практике

синие - метиловый синий, водный синий, опаловый синий; красные - фуксин основной, конго красный, сафранин, нейтральный красный,… фиолетовые - метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, генцианвиолет;

Техника окраски простым методом

2. Затем краску смывают дистиллированной водой и мазок обсушивают между двумя полосками фильтровальной бумаги. Обычно Фуксином I: 10 красят 10—30… При простой окраске микробные тела воспринимают цвет применяемой краски так же… Для повышения красящей способности воздействуют на краску высо­кой температурой (нагреванием) до появления паров…

Техника окраски сложным методом

Сложные методы окраски имеют важное дифференциально-диагностическое значение для характеристики изучаемого микроба.   Окраска по Граму

Окраска спор

Споры устойчивы к воздействию высоких температур, химических веществ, к высыханию, длительно сохраняются в почве, что объясняется их особым… Все методы окраски спор основаны на обеспечении проникновения красителя через…  

Окраска капсул

а) мазок готовят из свежего материала, так как капсула быстро лизируется; б) фиксируют мазок химическим способом, для окраски применяют… в) промывать мазок водой следует слабо и кратковременно.

Определение подвижности бактерий

   

Определение подвижности микроорганизмов

Каплю молодой (18-20 часовой) бульонной культуры бактерий бактериологической петлей наносят на покровное стекло. Специальным предметным стеклом с… Определение подвижности бактерий методом Шукевича Для этого каплю микробной взвеси наносят в конденсат скошенной плотной питательной среды в пробирке. Подвижные…

Задание для выполнения на занятии

1. Законспектировать раздел «Техника приготовления мазков» в рабочей тетради.

2. Законспектировать раздел «Высушиваниеи фиксирование мазков» в рабочей тетради.

3. Законспектировать раздел «Техника окраски простым методом» в рабочей тетради. Приготовить из предложенных культур микроорганизмов мазок и окрасить простым методом окраски микроорганизмов Увиденную в поле микроскопа картину зарисовать в рабочей тетради, используя цветные карандаши.

4. Законспектировать раздел «Техника окраски сложными методами» в рабочей тетради. Приготовить мазки из предложенных культур и окрасить и окрасить их по Граму, по Цилю-Нильсену, по Трухильо и по Ольту. Увиденную в поле микроскопа картину зарисовать в рабочей тетради, используя цветные карандаши.

5. Законспектировать раздел «Определение подвижности бактерий» в рабочей тетради. Зарисовать в рабочей тетради типы расположения жгутиков у бактерий. Освоить методики определения подвижности микроорганизмов.

Контрольные вопросы

1. Какова техника приготовления мазков из различного исследуемого материала?

2. Опишите методику «Техника окраски простым методом».

3. Каковы методики окраски микроорганизмов сложными методами окраски?

4. В чем сущность окраски по Граму?

5. Как определяют подвижность микроорганизмов?

 

 

Домашнее задание

1. Изучить порядок проведения посева и пересева микроорганизмов. Сделать конспект в рабочей тетради.

2. Подробно изучить и записать в тетради методы получения накопительных культур. Зарисовать в тетради рис.9.

3. Внимательно изучить и записать в тетради методы выделения чистых культур культур.

 

 

Рис. 9. Посев микроорганизмов на поверхность плотной среды в чашках Петри: а — шпатель Дригальского; б — положение чашки и рук при посеве шпателем; в — рост микроорганизмов после рассева шпателем; г — рост микроорганизмов пос­ле рассева петлей

 

Лабораторно-практическое занятие №3

Изучение морфологии бактерий

Цель занятия. Изучить и описать колонии бактерий, выросших на агаризованной среде, величину, край профиль колоний; приготовить препараты бактерий,… Материалы и оборудование. Микроскопы биологические, спиртовки, предметные… Методические указания. После объяснений преподавателя студенты конспектируют материал занятия и осваивают…

Методика выполнения лабораторной работы

- размер (диаметр) измеряют линейкой в миллиметрах: мельчайшие, точечные, крупноточечные — менее 1 мм; - цвет колоний и субстрата под колониями (от белого до черного); - форма — бывает круглая, овальная и т.д.

Задание для выполнения на занятии

1. Законспектировать материал занятия.

2. Выполнить лабораторную работу в соответствии с методикой, зарисовывая рисунки и заполняя таблицы.

 

Контрольные вопросы

1. Какие существуют методы исследования морфологии бактерий?

2. Какие существуют способы фиксации бактериальных препаратов?

3. Каковы преимущества и недостатки прижизненного микроскопического исследования микробов?

4. Каковы задачи микроскопического исследования окрашенных препаратов микроорганизмов? Каковы преимущества и недостатки этого способа?

5. Какая форма клеток у бактерий?

6. Какие группировки клеток бывают у шаровидных бактерий и как они называются?

7. Какие бактерии образуют споры?

8. Каково значении спор у бактерий?

9. Какими свойствами обладают споры?

10. За счет чего бактерии активно двигаются?

11. Как называются бактерии с разным числом жгутиков?

Домашнее задание

1. Самостоятельно изучить культуральные и морфологически признаки дрожжей. Законспектировать материал в рабочей тетради и сделать рисунок «Морфология дрожжей».

 

 

Рис 12. Цикл развития бактерий от споры до споры

 

 

Лабораторно-практическое занятие № 4

Изучение морфологии плесневых грибов.

Идентификация грибов до рода

Оборудование инструменты:чашки Петри с колониями плесневых грибов, предметные и покровные стекла, препаровальные иглы, спирт с глицерином (1:1),… Методические указания. После объяснений преподавателя студенты конспектируют…  

Методика выполнения лабораторной работы

При изучении отмечают: размер колоний, их форму, плотность, строение наружного края и центра, характер поверхности, цвет колоний, окраску субстрата… Результаты записывают в табл. 3 и 4.  

Ключ для определения рода плесневого гриба

2. Грибы размножаются конидиями, образующимися снаружи на особых конидиеносцах, реже — прямо на мицелии Спорангиеносцы, несущие спорангии, обычно… Спорангиеносцы ветвящиеся. Спорангии двух видов: крупные на главной оси и… 3. Спорангиеносцы одиночные, простые, иногда ветвящиеся. Спорангии мелкие или крупные, всегда однородные, бесцветные…

Задание для выполнения на занятии

1. Законспектировать материал занятия.

2. Выполнить лабораторную работу в соответствии с методикой, зарисовывая рисунки и заполняя таблицы.

 

Контрольные вопросы

1. Каково строение тела гриба?

2. Какие признаки грибов называются культуральными?

3. Как приготовить препарат плесневых грибов?

4. Как размножаются грибы?

5. Какие типы спор бывают у грибов?

6. Чем различается строение конидиеносцев у разных плесневых грибов?

 

Домашнее задание

 

1. Зарисовать грибы, не вошедшие в определитель, но встречающиеся на пищевых продуктах.

 

 

Список использованной литературы

1. Гусев М.В. Микробиология / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. – Издательский центр «Академия», 2007.

2. Жарикова Г.Г., Леонова И.Б. Основы микробиологии. Практикум. - Издательский центр «Академия», 2008.

3. Жарикова Г.Г. Микробиология продовольственных товаров. Санитария и гигиена / Г.Г. Жарикова. – М.: Издательский центр «Академия», 2005.

4. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб.: СпецЛит, 2002.

5. Мудрецова – Висс К.А. руководство к лабораторным занятиям по микробиологии: учебное пособие / К.А. Мудрецова – Висс, С.А. Колесник, Т.И. Гринюк. – М.: Экономика, 1975.

6. Оценка загрязненности пищевых продуктов микотоксинами. Т.3 / под ред. В.А. Перетрухина. – М.: (б.и.), 1985.

7. Перетрухина А.Т. Микробиология сырья и продуктов водного происхождения / А.Т. Перетрухина. – М.: ГИОРД, 2005.

8. Тутельян В.А. Микотоксины / В.А. Тутельян, Л.В. Кравченко. – М.: Медицина, 1985.

 

 

Феоктистова Н.А., Васильев Д.А.

РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

по дисциплине

«ОСНОВЫ МИКРОБИОЛОГИИ»

 

 

Подписано в печать

Формат Печать офсетная

Усл.п.л. Тираж экз. Заказ

432980 г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1